بیان و بررسی فعالیت آنزیم اورات اکسیداز در باکتری E.Coli

اوراتاکسیداز(اوریکاز) EC ۱.۷.۳.۴ یک آنزیم متصل به مس، فاقد کوفاکتور و متعلق به کلاس اکسیدوردوکتازهاست که در اکثرگونه ها اسید اوریک را به ۵-هیدروکسی ایزواورات تبدیل میکند و این ۵-هیدروکسی ایزواورات بسته به گونه مورد نظر بهآلانتوئین، اوره و آمونیاک تبدیل شده و از بدن دفع میشود. در انسان و بقیه ی پریمات ها ژن این آنزیم به علت جهش های non-sense غیرفعال شده است. در نتیجه میزان اسیداوریک موجود در بدن افزایش مییابد که افزایش بیش از حد آن باعث بروز بیماری هایی از قبیل نقرس، هایپراوراسمی، نارسایی کلیوی و...میشود. بنابراین اوریکاز میتواند به عنوان یک آنزیم دارویی برایکاهش سطح اوریک اسید خون مورد استفاده قرار گیرد. از این رو، با توجه به اثرات بارز خصوصیات فیزیکوشیمیایی پروتئین ها و باتوجه به اهمیت بالای آنزیم اوریکاز در پیشگیری و درمان بیماریهای مختلف و قیمت بالای این داروی وارداتی، آنزیم اوریکاز درباکتری اشریشیا کلی، ترانسفرم، بیان و تخلیص شد. سپس میزان فعالیت آن مورد بررسی قرارگرفت به طوری که پس از کشتشبانه، از سوسپانسیون باکتری های القاشده عمل تخلیص به کمک ستون نیکل سفارز انجام شد. پس از تخلیص پروتئین ها ازستون و به دست آمدن آنزیم اوریکاز میزان فعالیت آن را به کمک بافر مربوطه و دستگاه اسپکتوفتومتر در طول موج ۲۹۳ نانومتربررسی کرده و نتایج نشان می دهد که با توجه به میزان فعالیت مناسب آنزیم اوریکاز به دست آمده، این آنزیم قابلیت استفاده درصنعت دارویی دارد.

Keywords:

اورات اکسیداز , اسیداوریک , بررسی فعالیت