کلونینگ مولکول های shRNA در وکتور لنتی ویروسی به منظور ممانعت از تکثیر ویروس سپتی سمی خون ریزی دهنده

ویروس سپتی سمی خون ریزی دهنده (VHSV) از خطرناک ترین پاتوژن های عفونی آبزیان است و به عنوان تهدیدی جدی برای صنعت پرورش ماهی در نظر گرفته میشود. این ویروس متعلق به خانواده ی Rhabdoviridae میباشد و عمدتا ماهی قزل آلای رنگین کمان را آلوده میکند. تاکنون واکسن و درمان موثری بر علیه این ویروس گزارش نشده است. هدف از این تحقیق کلونینگ مولکول های shRNA در سیستم لنتی ویروسی برای خاموش کردن ژن NV ویروس VHS میباشد. ابتدا توالی های shRNA به کمک نرم افزار های مختلف طراحی و سپس سنتز شدند. برای تولید اولیگومر های دو رشته ای و کلونینگ آنها در وکتور مورد نظر، مقدار برابری از هر دو رشته ی سنس و آنتی سنس در شرایط مناسب با هم جفت شدند. از وکتور pCDH جهت کلونینگ استفاده شد. به منظور دستیابی به وکتور خطی، واکنش هضم دوگانه توسط آنزیم های EcoRI و BamHI انجام شد و سپس الحاق مولکول های shRNA با پلاسمید هضم شده توسط آنزیم T۴ لیگاز انجام گردید. محصول این مرحله در سلول های مستعد DH۵ ترنسفورم شد. برای تایید حضور توالی shRNA در پلاسمید، کلونی PCR انجام گردید و محصول PCR در کنار DNA لدر بر روی ژل برده شد. مشاهده ی باند مورد نظر بر روی ژل نشانه ای بر تایید کلونینگ است. امید است این مولکول های shRNA مبتنی بر وکتور به عنوان یک روش درمانی علیه ویروس سپتی سمی خون ریزی دهنده استفاده گردند.

Keywords:

کلونینگ , shRNA , ویروس سپتی سمی خون ریزی دهنده , وکتور لنتی ویروسی