محلول سازی و تخلیص بهینه پروتئین نوترکیب امتزاجی تری پاراتید بیان شده در اشریشیا کلی
Publish place: Modares Journal of Biotechnology، Vol: 10، Issue: 1
Publish Year: 1397
Type: Journal paper
Language: Persian
View: 26
This Paper With 7 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- I'm the author of the paper
Export:
Document National Code:
JR_BIOT-10-1_001
Index date: 24 December 2024
محلول سازی و تخلیص بهینه پروتئین نوترکیب امتزاجی تری پاراتید بیان شده در اشریشیا کلی abstract
اهداف: روش های تخریب سلولی مختلفی برای استخراج پروتئین های داخل سیتوپلاسمی وجود دارد. هدف مطالعه حاضر انتخاب بهترین روش استخراج پروتئین امتزاجی نوترکیب تری پاراتید از میزبان باکتریایی اشریشیا کلی و دستیابی به بهترین شرایط تخلیص آن بود.
مواد و روش ها: در مطالعه تجربی حاضر، سلول های باکتری با روش های سونیکاسیون با دورهای متفاوت، له کردن در نیتروژن مایع، هموژناسیون تحت دو فشار مختلف و روش شیمیایی شکسته شدند. نمونه های مربوط به رسوب و محلول رویی حاصل از هر روش، در ژل سدیم دودسیل سولفات الکتروفورز شدند. سلول های شکسته شده در محیط کشت لوریا برتانی جامد کشت و به روش گرم رنگ آمیزی شدند. کروماتوگرافی تمایلی نیکل برای خالص سازی پروتئین در شرایط واسرشته و غیرواسرشته به ترتیب با شیب pH و غلظت ایمیدازول به کار رفت. تمامی نمونه ها روی ژل سدیم دودسیل سولفات- پلی اکریل آمید برده شدند و محاسبه میزان پروتئین تخلیص شده با آزمون میکروبرادفورد صورت گرفت.
یافته ها: در دورهای ۲۰ و ۲۵دور در دقیقه بخش زیادی از پروتئین امتزاجی وارد بخش محلول شد. در روش له کردن در نیتروژن مایع، پروتئین ها بیشتر وارد بخش رسوب شدند. تخریب سلول ها در روش شیمیایی کامل بود. شکستن سلول ها با هموژناسیون تحت فشار ۵۰بار، بیشتر از ۱۵بار بود. در تخریب شیمیایی همراه با سونیکاسیون مقدار بسیار زیادی از پروتئین امتزاجی وارد بخش محلول شد. در شرایط غیرواسرشته هیچ پروتئین امتزاجی نوترکیبی با بافر جداسازی از ستون خارج نشد، اما در شرایط واسرشته مقدار زیادی از پروتئین تخلیص شد.
نتیجه گیری: در تخریب شیمیایی همراه با سونیکاسیون، ۷/۹۷% پروتئین کل به بخش محلول وارد می شود و تخلیص در شرایط واسرشته برخلاف شرایط غیرواسرشته به طور مناسب و مطلوب صورت می گیرد.
محلول سازی و تخلیص بهینه پروتئین نوترکیب امتزاجی تری پاراتید بیان شده در اشریشیا کلی Keywords:
Cell Disruption , E. coli , Purification , Recombinant Teriparatide Fusion Protein , تخریب سلولی , اشریشیا کلی , تخلیص , پروتئین امتزاجی نوترکیب تری پاراتید
محلول سازی و تخلیص بهینه پروتئین نوترکیب امتزاجی تری پاراتید بیان شده در اشریشیا کلی authors
سپیده عباس زاده
Department of Biotechnology, Iranian Research Organization for Science and Technology, Tehran, Iran
ناهید بختیاری
Department of Biotechnology, Iranian Research Organization for Science and Technology, Tehran, Iran
زهرا امینی بیات
Department of Biotechnology, Iranian Research Organization for Science and Technology, Tehran, Iran
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :
