مطالعه مولکولی ژن mnp در تجزیه کمپوست قارچ خوراکی دکمه ای سفید (Agaricus bisporus)

در قارچ خوراکی دکمه ای (Agaricus bisporus) آنزیم های مختلفی از ابتدای رشد میسلیومی تا انتهای دوره میوه دهی تجزیه ترکیبات لیگنینی را در محیط کمپوست بر عهده دارند. به منظور انجام مطالعات مولکولی بر روی آنزیم منگنز پراکسیداز در قارچ خوراکی دکمه ای سفید نژاد IM008 و آماده نمودن زمینه برای افزایش تولید این ا نزیم در قارچ خوراکی دکمه ای اقدام به جداسازی و همسانه سازی cDNA ژن کد کننده آنزیم منگنز پراکسیداز گردید. برای این منظور استخراج RNA از میسلیومهای رشد یافته قارچ خ وراکی بر روی محیط کشت مایع عصاره کمپوست انجام شد و cDNA آن بوسیله آنزیم رونوشت بردار معکوس ساخته شد. پس از تکثیر قطعه مورد نظر بوسیله واکنش زنجیره ای پلیمراز، قطعه تکثیر شده در ناقل pTZ57R/T قرار گرفت و سپس به باکتری E.coli سویه DH5 α منتقل گشت. پس از استخراج پلاسمید از باکتری های تراریخته، پلاسمید استخراج شده مورد هضم آنزیمی قرار رفت و در مرحله آخر قطعه تکثیر شده تعیین توالی شد. در نتایج بلاست توالی نوکلئوتیدی در مکانهای بازهای نوکلئوتیدی با شماره های 657 و 850 با توالی ژن nmp موجود در بانک اطلاعاتی NCBI تفاوت داشت که به ترتیب سبب تغییر اسید آمینه ایزولوسین به والین و اسید آمینه سرین به آلانین در توالی اسید آمینه قطعه cDNA همسانه شده، می شود.

Keywords:

قارچ خوراکی دکمه ای سفید , cDNAی ژن منگنز پراکسیداز , ناقل pTZ57R/T