امکان سنجی بیان ژن اینترفرون گامای انسانی در کلروپلاست گیاه توتون

اینترفرون گاما یکی از پروتئین های با ارزش در علم پزشکی است که در فعالیت های ضد ویروسی، مهار تکثیر ویروس و چندین فعالیت تنظیمی دستگاه ایمنی در پاسخ به عفونت های ویروسی و بیماری زا مشارکت دارد. تراریختی کلروپلاستی به دلیل مزایای زیادی که دارد از جمله تجمع مقدار زیاد پروتئین خارجی در کلروپلاست و عاری بودن این پروتئین ها از پاتوژن های انسانی، امکان تولید پروتئین های نوترکیب را با هزینه ای پایین و به روی مطمئن فراهم می نماید. در این تحقیق هدف بررسی امکان استفاده از روش تراریختی کلروپلاستی برای تولید اینترفرون گاما بود. ژن اینترفرون گاما در وکتور کلروپلاستی pKCZ به صورت دیسیسترونی همسانه سازی شد و ذرات طلای پوشش داده شده با این وکتور روی برگهای توتون بوسیله تفنگ ژنی شلیک شد. قطعات برگی به محیط ساقه زایی حاوی آنتی بیوتیک منتقل شدند. گیاهچه های باززاشده جهت تولید ریشه به محیط MS انتقال یافتند. واکنش PCR با پرایمرهای اختصاصی حضور ژن اینترفرون گاما را در این گیاهان تأئید کرد و RT-PCR بر روی cDNA ساخته شده از RNA ی کل گیاه، رونویسی از این ژن را تأئید کرد. برای تأئید بیان ژن در سطح پروتئین از ژل SDS-PAGE و تست دات بلات استفاده شد. همچنین برای رساندن گیاهان به هموپلاسمی چهار دور باززایی انجام گرفت.

Keywords:

اینترفرون گاما , وکتور کلروپلاستی , بیان دیسیسترونی