طراحی و ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی فیوژن پروتئین CFP-10،ESAT-6 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس
Publish place: Iranian Journal of Medical Microbiology، Vol: 4، Issue: 3
Publish Year: 1389
Type: Journal paper
Language: Persian
View: 888
This Paper With 8 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- I'm the author of the paper
Export:
Document National Code:
JR_IJMM-4-3_001
Index date: 27 October 2014
طراحی و ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی فیوژن پروتئین CFP-10،ESAT-6 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس abstract
در قرن گذشته تنها روش تشخیص عفونت نهفته مایکوهاکتر یوم توبرکولو زیس آزمایش پوستی توبرکولین بود. این آزمای در بیماران آلوده با دیگر مایکوباکتریومها و در افراد واکسینه با BCG نتا یج مثبتکاذب دارد. لذا، لزوم روشهای تشخیصی کارآمد، سریع و دقیق مطرح میشود. دو آنتیژن CFP-10 و ESAT-6 در تمام مایکوباکتریومهای پاتوژن وجود دارد ولی در سویههای مولد واکسن BCG و مایکوباکتریومها ی فرصتطلب از جمله مایکوباکتریوم آویوم وجود ندارد. هدف این مطالعه ساخت سازه بیانی فیوژن پروتنین متشکل از دو ژن اختصاصی رمز کننده CFP-10 و ESAT-6 بود. این فیوژن پروتیین در آزمای اختصاصی تشخیص عفونتفعال و نهفته مایکو باکتریوم توبر کولوزیس بهکار برده میشود.روش بررسی: DNA مایکوباکتریوم توبرکولوزیس H37Rv استخراج و تعیین غلظت گردید. برای تکثیر قطعاتESAT-6 ، CFP-10 و قطعه شامز ESAT-6 و CFP-10 پرایمر طراحی گردیهد و PCR و Overlap PCR انجام شد. محصول PCR حاصل از فیوژن ESAT-6 و CFP-10 در پلاسهم ید pTZ57T/A کلون شد. سپس پلاسمیدpQE-60 و pT-ESAT-CFP با دو آنزیم BamHI و NcoI هضم شد. محصول هضم آنزیمی روی ژل آگارز الکتروفورز شد. باندهای DNA حاوی ESAT-CFP و pQE-60 خطی شده از ژل آگارز اسهتخراج گردید. قطعه ESAT-CFP در pQE-60 کلون مجدد شد. کلونهای بهدست آمده با PCR ، هضم آنزیمی وتعیهین تهوالی ارز یه ابیگردید. پلاسمید نهایی pQ-ESAT-CFP نامیده شد. یافتهها: محصولات PCR ، پلاسمید pT-ESAT-CFP و پلاسمید نهایی با هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شدند. نتیجهگیری : با بیان سازه ژنی pQ-ESAT-CFP و تخلیص فیوژن پروتنین حاصهل میتوان ازآن برای ساخت کیت تشخیصی مایکوباکتریوم توبر کولوزیس، جایگزین آزمایش توبرکولین، استفاده کرد
طراحی و ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی فیوژن پروتئین CFP-10،ESAT-6 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس Keywords:
طراحی و ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی فیوژن پروتئین CFP-10،ESAT-6 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس authors
مرصع فرناد
دانشگاه آزاد اسلامی واحد زنجان
حسین خان احمد شهررضا
مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
بهمن تبرائی
مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
بهادر یزدان پناه
مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران