طراحی و ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی فیوژن پروتئین CFP-10،ESAT-6 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس

در قرن گذشته تنها روش تشخیص عفونت نهفته مایکوهاکتر یوم توبرکولو زیس آزمایش پوستی توبرکولین بود. این آزمای در بیماران آلوده با دیگر مایکوباکتریومها و در افراد واکسینه با BCG نتا یج مثبتکاذب دارد. لذا، لزوم روشهای تشخیصی کارآمد، سریع و دقیق مطرح میشود. دو آنتیژن CFP-10 و ESAT-6 در تمام مایکوباکتریومهای پاتوژن وجود دارد ولی در سویههای مولد واکسن BCG و مایکوباکتریومها ی فرصتطلب از جمله مایکوباکتریوم آویوم وجود ندارد. هدف این مطالعه ساخت سازه بیانی فیوژن پروتنین متشکل از دو ژن اختصاصی رمز کننده CFP-10 و ESAT-6 بود. این فیوژن پروتیین در آزمای اختصاصی تشخیص عفونتفعال و نهفته مایکو باکتریوم توبر کولوزیس بهکار برده میشود.روش بررسی: DNA مایکوباکتریوم توبرکولوزیس H37Rv استخراج و تعیین غلظت گردید. برای تکثیر قطعاتESAT-6 ، CFP-10 و قطعه شامز ESAT-6 و CFP-10 پرایمر طراحی گردیهد و PCR و Overlap PCR انجام شد. محصول PCR حاصل از فیوژن ESAT-6 و CFP-10 در پلاسهم ید pTZ57T/A کلون شد. سپس پلاسمیدpQE-60 و pT-ESAT-CFP با دو آنزیم BamHI و NcoI هضم شد. محصول هضم آنزیمی روی ژل آگارز الکتروفورز شد. باندهای DNA حاوی ESAT-CFP و pQE-60 خطی شده از ژل آگارز اسهتخراج گردید. قطعه ESAT-CFP در pQE-60 کلون مجدد شد. کلونهای بهدست آمده با PCR ، هضم آنزیمی وتعیهین تهوالی ارز یه ابیگردید. پلاسمید نهایی pQ-ESAT-CFP نامیده شد. یافتهها: محصولات PCR ، پلاسمید pT-ESAT-CFP و پلاسمید نهایی با هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شدند. نتیجهگیری : با بیان سازه ژنی pQ-ESAT-CFP و تخلیص فیوژن پروتنین حاصهل میتوان ازآن برای ساخت کیت تشخیصی مایکوباکتریوم توبر کولوزیس، جایگزین آزمایش توبرکولین، استفاده کرد

Keywords:

سل نهفته , فیوژن پروتئین ESAT-6CFP-10 , کوآنتی فرون