همسانه سازی ناحیه UTR5′و پپتید نشانهی ژن granule bound starch synthase رقم آگریا در سیب زمینی

پایین بودن سطح بیان ژنهای انتقالی به گیاهان تراریخته از مهمترین فاکتورهای محدود کننده مهندسی ژنتیک گیاهی است. بنابراین فعالیتهای تنظیمی پروموترها در رونویسی برای بهبود کارایی سیستم تراریخت گیاهی، مورد مطالعه قرار میگیرد. به دلیل اهمیت سیب زمینی به عنوان چهارمین غذای مصرفی این تحقیق روی گیاه مزبور انجام شد. از آنجاییکه غدهی سیب زمینی قسمت خوراکی و مصرفی این گیاه محسوب میشود، شناسایی و جداسازی ناحیه سیگنال پپتید وUTR5 ژن اختصاصی غده gbssبرای هرگونه دستکاری ژنتیکی آتی هدف اصلی این تحقیق میباشد. همچنین وجود توالی پپتید نشانه موجب انتقال پروتئین نوترکیب به بافت یا اندام مورد نظر میشود. با توجه به اطلاعات مربوط به ژن gbssدر NCBI آغازگرهای اختصاصی، طراحی و برای تولید سفارش داده شدند. برای دسترسی به نواحی مورد نظر، پس از استخراج DNAازگیاه سیب زمینی، واکنش زنجیرهای پلی مراز با استفاده ازآغازگرهای اختصاصی انجام پذیرفت. سپس، این قطعات در پلاسمید pGEM-T همسانه سازی شدند و باکتری های تراریخت، تولید شده و پلاسمیدهای استخراج شده از آنها، از طریق آنزیمهای برشی، مورد تایید قرار گرفتند. و نهایتا، برای تعیین توالی آنها اقدام شد. توالیهای حاصله، مجددا مورد بررسی های بیوانفورماتیکی قرارگرفته و نتیجه گیریهای لازم یعنی شباهت قطعات همسانه سازی شده با اطلاعات موجود درNCBIمورد تایید قرار گرفت.

Keywords:

غدهی سیب زمینی ید نشانه , gbss , 5'UTR