و روش stx2B و wzyO با استفاده از ژنهای 157 Escherichia coli O157:H شمارش باکتری 7(Lactuca sativa) در آب آلوده به باکتریهای سطحی گیاه کاهو Real Time PCR

وجود باکتریهای بیماریزا در منابع آبی و غذایی در دسترس، عامل اصلی بروز بسیاری از مسمومیتها و عفونتهای حاد میباشد.E. همچنین با توجه به غیر قابل کشت بودن برخی از سویه های موجود در مجموعه این عوامل بیماریزا (از جمله سویههایی از و عدم توانایی در استفاده از روشهای وابسته به کشت در تشخیص آنها، وجود روشی دقیق، سریع و غیر وابسته به کشت (coli برای تشخیص حضور این عوامل، در منابع آبی و غذایی گوناگون، ضروری مینماید. معرفی روش Real time PCR به عنوان روش جایگزین و بسیار دقیقتر، سریعتر و حساستر نسبت به آزمایشات کنونی تشخیص کیفیت آب و غذا که در آزمایشگاهای تشخیص کیفی صنایع غذایی و سازمان آب انجام میپذیرد، هدف اصلی از انجام این پژوهش است. در این تحقیق، آغازگرهای اختصاصی، برای ژنهای اختصاصی بیماریزایی wzyO157 و stx2B در باکتری E. coli O157:H7 طراحی شد و به صورت PCR تکی جهت بررسی میزان حساسیت وتعیین کمیت تعداد باکتریهای قابل شناسایی و PCR چندگانه (با استفاده از هر دو ژن)، برای بررسی اختصاصیت کامل این ژنها انجام پذیرفت. رنگ فلورسانت استفاده شده SYBR Green II بود و از روش کمیت سنجی مطلق برای تخمین تعداد باکتریهای موجود در نمونه آب آلوده به باکتریهای جدا شده از کاهو استفاده گردید. بررسی نتایج این تحقیق نشانگر دقت، حساسیت و سرعت فوقالعادهی Real Time PCR در مقایسه با روشهای شناسایی وابسته به کشت، وابسته به ویژگیهای بیوشیمیایی، متابولیک و حتی ایمونولوژیک میباشد.

Keywords:

آب آلوده , کمیتسنجی , کاهو , E. coli O157:H7 , Real Time PCR