بیان استخراج، تخلیص و بررسی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب زیرواحد تئانوتوکسین و جداسازی آنتی بادی پلیکلونال علیه آن

زمینه وهدف: عامل بیماری مهلک کزاز توکسین کلستریدیوم تتانی با وزن 150 کیلودالتون می باشد. از گذشته تاکنون از توکسوئید این باکتری به عنوان واکسن استفاده می شود. مهم ترین توکسین این باکتری، تتانواسپاسمین شامل سه بخش اصلی زنجیره ، L، HN و HC می باشد. دومین اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن، بخش HC است و می تواند به عنوان کاندید واکسن مطرح باشد. هدف از این مطالعه طراحی و تهیه ژن صناعی جهش یافته این بخش، تولید و تخلیص و بررسی ایمن زایی پروتئین نوترکیب حاصل از آن و در نهایت تهیه سرم و آنتی بادی پلیکلونال علیه آن می باشد. روش بررسی: دراین مطالعه توصیفی- آزمایشگاهی پس از تعیین ترادف ژن دومین اتصال دهنده تتانو توکسین، ژن سنتتیک جهش یافته در وکتور بیانی تهیه گردیده و تایید آن به کمک PCR انجام شد. سپس این سازه ژنی به میزبان E.Coli Bl21 DE3 منتقل شده و پس از فرایند بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب و تاییدباوسترنبلاتینگ، ایمنی زایی در حیوان آزمایشگاهی صورت گرفت. درنهایت ضمن بررسی تیتر آنتی بادی، آنتی بادی پلیکلونال علیه تتانوتوکسین از سرم جداسازی و تخلیص گردید. یافته ها: ژن صناعی زنجیره HC تتانوتوکسین تهیه شده در وکتور بیانی pET28a مورد ارزیابی صحت قرارگرفت. پس از بیان و تخلیص با ستون نیکل، نتایج وسترنبلات تایید کننده پروتئین نوترکیب بود. ایمنی زایی دو مدل موش و خرگوش نشان از تیتر بالای آنتی بادی علیه پروتئین نوترکیب داشت. درنهایت جداسازی و تخلیص آنتی بادی پلیکلونال علیه تتانوتوکسین از سرم حیوانات ایمن به خوبی انجام گردید. نتیجه گیری: تولید پروتئین نوترکیب بخش HC وبررسی ایمنی زایی آن، نشان دهنده تیتر بالایی از آنتی بادی پلیکلونال در سرم حیوان علیه تتانوتوکسین می باشد.

Keywords:

توکسین کزاز , پروتئین نوترکیب , آنتی بادی پلیکلونال , دومین HC