بهینه سازی انحلال پروتیین نوترکیب اینترفرون بتا تولید شده به صورت اینکلوژن بادی و بازتاخوردگی مجدد آن

تولید داروهای نوترکیب به خاطر تشکیل اینکلوژنبادی ناشی از بیش بیان پروتیین نوترکیب با دشواری های همراه است. بیان اینترفرون بتاb1 در باکتری اشریشیا کلای به شکل یک پروتیین غیرگلایکوزیله شده است که داخل سلول به صورت اینکلوژن بادی تجمع می یابد. اینکلوژن بادی ها غیرفعال و نامحلول هستند. به منظور به دست آوردن پروتیینی زیست فعال، نیاز به حل کردن اینکلوژن بادی ها با استفادهاز عوامل واسرشته کننده و سپس حذف این عوامل در حضور بافر بازتاخوردگی مناسب است. انحلال اینکلوژن بادی ها با یک روش مناسب،در فرایندهای پایین دستی پروتیین های تولید شده به صورت توده های درون سلولی از اهمیت زیادی برخوردار است. هدف این تحقیقمقایسه بافرهای انحلال متفاوت برای حل کردن اینکلوژن بادی اینترفرون بتا b1 است. بهینه سازی انحلال برای مقدار مشخص اینکلوژن بادی در پروسه خالص سازی و بازتاخوردگی پروتیین نوترکیب نقش موثری دارد. انحلال اینکلوژن بادی ها تحت شرایط متفاوت با استفاده از اسدی اس و حلال های آلی متفاوت در شرایط ویژه pH انجام شد. ترکیب های مختلفی از اس دی اس با حلال های آلی برای انحلال اینکوژن بادی اینترفون بتا b1 مورد آزمایش قرار گرفت که بهترین نتیجه با محلول انحلال حاوی 1% اس دی اس به همراه 37/5% 1پروپانول و 15% 2- بوتانول با 2 =pH به دست آمد. این بافر توانست به صورت موثر اینکلوژنبادی را با خلوص بالای اینترفرون بتا b1 حل نماید. به طور عمومی، راه کارهای بازتاخوردگی این توده های پروتیینی شامل دیالیز، رقیق سازی و روشهای روی ستون می شود که از این میان روشرقیق سازی بافر بازتاخوردگی به درون پروتیین واسرشته مورد استفاده قرار گرفت. بازتاخوردگی اینترفرون در غلظت 3 میلی مولار سیستین و pH=8/5 انجام شد. در این شرایط، بازده بازتاخوردگی اینترفرون معادل 60 % به دست آمد که در مقایسه با مطالعات پیشین، نتیجه مطلوبی است.

Keywords:

اینترفرون بتا , اینکلوژن بادی , پروتیین گلایکوزیله نشده , بازتاخوردگی