بیان پروتیین نوترکیب انتروتوکسین کلستریدیوم پرفرینجنز در باکتری E.coli و بررسی ویژگی های مولکولی آن

باکتری کلستریدیوم پرفرینجنز (C. Perfrinjens) یک باسیل گرم مثبت بی هوازی غیرمتحرک ودارای کپسول به طول 2تا 4 میکرون و عرض 0/5 تا 1/5 میکرون است. باکتری C. Perfrinjens سبب ایجاد طیف وسیعی از بیماری هایی شامل مسمومیت غذایی، گانگرن گازی، انتریت نکروزی، عفونت های معدی- روده ای با منشاء غیرخوراکی در انسان و انتروتوکسمی، قلوه نرمی و عفونت های سیستم گوارشی در دام بوده که می تواند به سرعت منجر به مرگ شود. 17 نوع اگزوتوکسین توسط باکتری C. perfrinjens تولید می شود که 4 توکسین اصلی آن؛ آلفا، بتا، اپسیلون و یوتا می باشد و توکسین های فرعی به نام های سیگما، تتا، کاپا، لامبدا، مو، نو، نوآمیداز و انتروتوکسین می باشد. عامل بسیاری از مسمومیت های غذایی این باکتری, انتروتوکسینکلستریدیوم پرفرینجنز ((Clostridium perfringens entrotoxin (CPE) است که در مسمومیت های غذایی و بیماری های گوارشی نقش دارد. در پیشینه این پژوهش باکتری فریزدرای شده تیپ D و C در محیط مناسب کشت داده شده و DNA ژنومی با روش فنول کلروفرم و پلاسمید با استفاده از کیت تخلیص پلاسمید, استخراج گردید و به منظور تکثیر ژن انتروتوکسین واکنش PCR انجام گرفت. ژن حاصل در وکتور pTG19-T لایگیت و محصول لایگیشن به سویه TOP10 باکتری E. coli ترانسفورم گردید. در پژوهش حاضر وکتور نوترکیب از باکتری نوترکیب E.coli/Top10/pTG.ent استخراج شد و ژن انتروتوکسین از وکتور نوترکیب حاوی ژن انتروتوکسین به روش برش آنزیمی استخراج و به وکتور بیانی +pET22b لایگیت و محصول لایگیشن به باکتری میزبان E. coli/Rosseta ترانسفورم شد. برای تایید حضور ژن انتروتوکسین در میزبان فرآیند Colony PCR انجام شد. با استخراج پلاسمید نوترکیب توالی یابی ژن انترو توکسین به منظور تایید صحت وکتور بیانی نوترکیب انجام شد که با توالی موجود مطابقت داشت. پروتیین توکسین انتروتوکسین در باکتری نوترکیب E. coli/Rosseta/pET.ent بیان و با روش SDS-PAGE و Western blot تایید گردید.

Keywords:

, C. Perfrinjens , انتروتوکسین , بیان ژن , پروتیین نوترکیب