بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب کریپتوکروم DASH1 جلبک سبز Volvox carteri در باکتری Escherichia coli: بررسی حلالیت و اتصال به DNA

سعید مهدوی; جعفر رازقی; مقصود پژوهنده; آرش کیانیان مومنی

بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب کریپتوکروم DASH1 جلبک سبز Volvox carteri در باکتری Escherichia coli: بررسی حلالیت و اتصال به DNA

Publish place: Journal of agricultural biotechnology، Vol: 10، Issue: 4

Publish Year: 1397

Type: Journal paper

Language: Persian

This Paper With 24 Page And PDF Format Ready To Download

DOWNLOAD Paper

Certificate
I'm the author of the paper

Export:

Link to this Paper:

https://civilica.com/doc/864815

Document National Code:

JR_JOAGK-10-4_009

Index date: 10 June 2019

بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب کریپتوکروم DASH1 جلبک سبز Volvox carteri در باکتری Escherichia coli: بررسی حلالیت و اتصال به DNA abstract

هدف: اپتوژنتیک به عنوان یک شاخه علمی جدید، از فتورسپتورها به منظور اجرای تحقیقات پایه ای و کاربردی استفاده می کند. یکی از راه های توسعه اپتوژنتیک، شناسایی فتورسپتورهای جدید و تعیین خصوصیات آن هاست. کریپتوکروم های DASH متعلق به خانواده پروتئینی کریپتوکروم/فتولیاز، فتورسپتورهای دارای قابلیت ترمیم DNA بوده و در مسیرهای پیام رسانی علامت نقش دارند. هدف این تحقیق، تولید کافی پروتئین پیش گویی شده کریپتوکروم DASH1 ولوکس (VcCryDASH1)، برای استفاده در مطالعات طیف جذبی و نیز بررسی قابلیت ترمیم DNA می باشد. مواد و روشها: ابتدا توالی کدکننده پروتئین VcCryDASH1 با استفاده از آغازگرهای اختصاصی، از کتابخانه cDNA جلبک Volvox carteri جداسازی و در پلاسمید بیانی pGEX-2TK همسانه سازی شد. تولید پروتئین نوترکیب در دو سویه متفاوت باکتری E. coli و همچنین تحت تاثیر زمان های مختلف القاء با IPTG و همچنین میزان انحلال پذیری آن توسط روش SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. بررسی قابلیت اتصال به DNA در این پروتئین، با روش همردیف سازی انجام شد. نتایج: تولید کافی پروتئین، در سویه Rosetta، در °C32، و زمان القاء بیش از 3 ساعت بدست آمد. در زمان القاء 1 و 3 ساعت، نیمی از پروتئین به صورت نامحلول بود. همردیف سازی پروتئین VcCryDASH1 مشخص نمود که درصد بالایی از آمینواسیدهای متصل شونده به DNA، در این پروتئین حضور دارند. نتیجه گیری: این نتایج نشان می دهند که پروتئین VcCryDASH1 تحت شرایط بهینه ، دارای قابلیت انحلال پذیری دوگانه بوده اما روش ما می تواند مقدار کافی آن را در باکتری E. coli سویه Rosetta تولید کند. همچنین بدلیل داشتن آمینواسیدهای حفاظت شده ، این پروتئین دارای قابلت اتصال به DNA می باشد که آن را به عنوان یک منبع احتمالی جهت طراحی مولکول های میانجی نور-DNA در اپتوژنتیک معرفی می نماید.

بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب کریپتوکروم DASH1 جلبک سبز Volvox carteri در باکتری Escherichia coli: بررسی حلالیت و اتصال به DNA Keywords:

سویه Rosetta , کریپتوکروم DASH1 , وکتوربیانی , Volvox carteri

بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب کریپتوکروم DASH1 جلبک سبز Volvox carteri در باکتری Escherichia coli: بررسی حلالیت و اتصال به DNA authors

سعید مهدوی

دانشجوی دکتری تخصصی فیزیولوژی گیاهی، گروه زیست شناسی گیاهی، دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران

جعفر رازقی

گروه زیست شناسی گیاهی، دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران

مقصود پژوهنده

دانشیار، گروه بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، کیلومتر ۳۵ جاده تبریز- آذر شهر، ایران

آرش کیانیان مومنی

دانشیار، گروه زیست شناسی سلولی و تکوینی گیاهی، دانشگاه بیله فلد، بیله فلد، آلمان

مراجع و منابع این Paper:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :

Ahmed H (2004) Principles and reactions of protein extraction, purification, ...

Birnboim HC (1983) A rapid alkaline extraction method for the ...

Brudler R, Hitomi K, Daiyasu H et al. (2003) Identification ...

Chaves I, Pokorny R, Byrdin M et al. (2011) The ...

Crick F (1999) The impact of molecular biology on neuroscience. ...

Crick FH (1979) Thinking about the brain. Sci Am 241, ...

Deisseroth K (2011) Optogenetics. Nat Methods 8, 26–29. ...

Deisseroth K, Feng G, Majewska AK et al. (2006) Next-generation ...

Kianianmomeni A (2015) UVB-based optogenetic tools. Trends Biotechnol 33, 59–61. ...

Kianianmomeni A, Hallmann A (2016) Algal Photobiology: A Rich Source ...

Kianianmomeni A, Stehfest K, Nematollahi G et al. (2009) A ...

Konermann S, Brigham MD, Trevino A et al. (2013) Optical ...

Laemmli UK (1970) Cleavage of Structural Proteins during the Assembly ...

Li YF, Sancar A (1990) Active site of Escherichia coli ...

Lin C, Todo T (2005) The cryptochromes. Genome Biol 6, ...

Mahajan P, Strain-Damerell C, Gileadi O, Burgess-Brown NA (2014) Medium-throughput ...

Miesenbock G (2009) The optogenetic catechism. Science 326, 395–399. ...

Nagel G, Ollig D, Fuhrmann M et al. (2002) Channelrhodopsin-1: ...

Nagel G, Szellas T, Huhn W et al. (2003) Channelrhodopsin-2, ...

Rath A, Glibowicka M, Nadeau VG et al. (2009) Detergent ...

Sievers F, Higgins DG (2018) Clustal Omega for making accurate ...

Torizawa T , Ueda T, Kuramitsu S et al. (2004) ...

Walsh G (2014) Proteins: biochemistry and biotechnology (2nd edn), Wiley ...

نمایش کامل مراجع