محلول سازی و تا خوردگی مجدد اجسام اینکلوژن پروتئین نو ترکیب پوششی ویروس برگ باد بزنی مو تولید شده در Escherichia coli

هدف: سطوح بالای بیان ژن ­های خارجی در سلول ­های میزبان به ویژه در باکتری ­ها اغلب منجر به تشکیل اجسام اینکلوژن[1] می­شود. وجود اسید­آمینه سیستئین در ساختار پروتئین­ها به تشکیل این اندامک نیز کمک می­کند. پیوند­های دی­سولفیدی درون و بین­مولکول­های پروتئین غنی از سیستئین پوششی ویروس برگ باد­بزنی مو باعث تشکیل اجسام اینکلوژن پس از بیان در Escherichia coli می­شود. از این­رو به منظور به­دست آوردن پروتئین نو­ترکیب با ساختار طبیعی، ضروری است پروتئین­های تولید شده در سلول باکتری به شکل محلول در­آیند. مواد و روش: در مطالعه حاضر برای تا­خوردگی مجدد ساختار پروتئین­ها از حلال آمفی­پاتیک 2 متیل 2،4پنتان دیول (MPD) در حضور سدیم دو­دسیل سولفات (SDS) استفاده شد. به این منظور ابتدا اجسام اینکلوژن حاوی پروتئین پوششی نا­محلول ویروس برگ باد­بزنی مو با استفاده از عامل دناتوره کننده سدیم دو­دسیل سولفات محلول شد. سپس پروتئین پوششی محلول با استفاده از روش کروماتوگرافی اندازه[2] خالص­سازی شد و در نهایت پروتئین­های پوششی خالص با استفاده از روش MPD/SDS تا­خورده شد­ند. نتایج: تصاویر میکروسکوپ الکترونی عبوری تا­خوردگی مجدد ذرات شبه­ویروسی برگ باد­بزنی مو را تایید کرد. نتیجه گیری: به نظر می­رسد حلال MPD سبب تعدیل خواص دناتوره کننده سدیم دو­دسیل سولفات شده و به این ترتیب روشی ساده، کار­آمد و موثر برای تا­خوردگی مجدد پروتئین پوششی غنی از سیستئین ویروس برگ باد­بزنی مو معرفی ­شد. [1]- inclusion body [2]- size exclusion chromatography

Keywords:

پروتئین غنی از سیستئین , کروماتوگرافی اندازه , میکروسکوپ الکترونی