بیان، تخلیص پروتئین کایمر نوترکیب واجد StxB،IpaB،IpaD وVirG از جنس شیگلا در باکتریE.coli

باکتریهای جنس شیگلا عضوی از خانواده بزرگ باکتریهای روده ای مرسوم به انتروباکتریاسه هستند. این باکتری ها گرم منفی هستند که برخی گونه های آن مانند شیگلا دیسانتری باعث نوعی اسهال به نام شیگلوز میشوند. شیگلا به کمک مجموعهای پروتئینی در دیواره خود با عنوان سیستم ترشحی تیپ III به مانند سوزنی عمل کرده و پروتئین های گذرنده از خود را به داخل سلولهای میزبان (در این باکتری، سلولهای M رودهای) تزریق کرده، مورد تهاجم قرار میدهد. تا امروز فاکتورهای متنوعی از باکتری شیگلا به عنوان عوامل بیماری زایی موردتوجه قرارگرفته اند که ازجمله آنها می توان به زیر واحد اتصالی سم شیگلا (StxB) و پروتئینهای IpaB،IpaD و VirG اشاره کرد. در این پژوهش، سازه کایمر چهار ظرفیتی StxB،IpaB،IpaDوVirG در وکتور pET32a(+) ، با انتقال به سلولهای مستعد (E. coli BL21(DE3) و با القاء مصنوعی IPTG، به شکل نوترکیب تولید گردید. بیان پروتئین نوترکیب با SDS - PAGE ارزیابی و به کمک وسترن بلات تایید شد. پروتئین نوترکیب (IBSDV) به روش کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص شد. بیان پروتئین مربوطه با بررسی بیان بر روی ژل اکریل امید انجام گرفت که نتیجه حاکی از باند پروتئینی با وزن تقریبا 81 کیلو دالتونی بود و به کمک وسترن بلات تائید گردید. این پروتین میتواند به عنوان کاندید ایمونوژن جهت مقابله با عوامل بیماریزایی شیگلا مورد مطالعه و استفاده قرار گیرد.

Keywords:

شیگلا , VirG , StxB , IpaB , IpaD