بررسی بیان پروتیین gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در E.coli

سابقه و هدف: کریپتوسپوریدیوم یک انگل تک یاخته ای دارای اهمیت در پزشکی و دامپزشکی است که سبب اسهال و استفراغ در طیفوسیعی از مهره داران می شود. برخی از آنتی ژن های سطحی انگل از جمله gp40/15 در اتصال و تهاجم به سلول میزبان و تحریک سیستم ایمنی نقش مهمی بر عهده دارند. با کلون و بیان نمودن این آنتی ژن ها امکان دسترسی به پروتیین های نوترکیب انگل فراهم می شود.هدف این مطالعه بیان ژن gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در باکتری اشرشیاکلی است. مواد و روش ها: توالی ژن gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم از بانک ژن به شماره AF155624 استخراج و به صورت صناعی در +PET28a کلون و تهیه گردید. جهت تایید از روش های Colony PCR و هضم آنزیمی به وسیله آنزیم های محدودکننده BamHI و Xhol استفاده شد. پلاسمید نوترکیب به داخل باکتری اشرشیاکلی منتقل شده و بیان پروتیین با استفاده از SDS-PAGE وسترن بلات والایزا با استفاده از سرم حاوی آنتی بادی بر ضد انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم تایید شد و سپس با ستون کروماتوگرافی تخلیص گردید.نتایج: نتایج نشان داد که ژن gp40/15 در پلاسمید +PET28a کلون شده است و نتایج ColonyPCR و هضم آنزیمی پلاسمید +PET28a حاوی ژن gp40/15، قلعه 921bp را نشان داد. بیان pEgp40/15 به طور موفقیت آمیزی در باکتری اشرشیا کلی بیان شده و پروتیین نو ترکیب gp40/15 درآن تولید شده است. لذا، می توان از این پروتیین در مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن های پروتیینی نوترکیب و طراحی کیت تشخیصی استفاده نمود.

Keywords:

کریپتوسپوریدیوم پارووم , ژن gp40/15 , بیان پروتیین , اشرشیاکلی