همسانه سازی و بیان ژن سلوبیوهیدرولاز cel B در مخمر Pichia pastoris
Publish Year: 1397
Type: Journal paper
Language: Persian
View: 401
This Paper With 13 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- I'm the author of the paper
Export:
Document National Code:
JR_GEB-7-2_004
Index date: 22 February 2020
همسانه سازی و بیان ژن سلوبیوهیدرولاز cel B در مخمر Pichia pastoris abstract
آنزیم Cel6B از باکتری Thermobifidia fusca، یک CBHII متعلق به خانواده بی سلولازهاست که بسیار مقاوم به حرارت است. به علت میزان پایین تولید این آنزیم در میزبان اولیه نمیتوان از این میزبان برای تولید آنزیم در مقیاس صنعتی استفاده نمود. به منظور بیان این آنزیم در مخمر، ژن سلوبیوهیدرولاز موجود در سازه PSZ143 با PCR تکثیر و به درون ناقل مخمری pPICZ A، همسانه سازی شد. سازه نوترکیب حاوی ژن cel B، به باکتری E. coli Jm109 منتقل شده و باکتریهای نوترکیب بر روی محیط کشت LB حاوی 0/5 ʽg/ml بلیومایسین، انتخاب شد. سازه نوترکیب خطی شده، با استفاده از الکتروپوریشن به مخمرPichia pastoris سویه های GS115 و KM71H منتقل شد. در نهایت بهترین غلظت متانول و بهترین روز بیان آنزیم نیز با روش DNS تعیین شد. نتایج نشان داد، بیشترین میزان فعالیت سلوبیوهیدرولاز در سویه های GS115 و KM71H و بر روی PC (پنبه اسید فسفریک شده) در دمای 50°C و به مدت 16 ساعت، به ترتیب 1/98 و 0/475 U( mol/min)/ml است. نمونه مربوط به کلنی پر محصول سویه GS115 بر روی ژل SDS-PAGE بارگزاری و بیان آنزیم تایید شد و سپس نتایج بهترین غلظت متانول و بهترین روز بیان آنزیم با همین سویه، در روز چهارم بعد از القاء با 3 درصد متانول (V/V) به دست آمد. عدم بهینهسازی کدون های ژن همسانه شده به پلاسمید مخمری باعث کاهش بیان و کاهش فعالیت سلوبیوهیدرولازی آن شد. مخمر پیشیا میزبان مناسبی برای بیان این آنزیم است که با بهینه سازی کدونهای توالی کدکننده این ژن، می توان بازدهی بیان را بهبود داد.
همسانه سازی و بیان ژن سلوبیوهیدرولاز cel B در مخمر Pichia pastoris Keywords:
همسانه سازی و بیان ژن سلوبیوهیدرولاز cel B در مخمر Pichia pastoris authors
فهیمه حیدری قره سو
دانش آموخته کارشناسی ارشدبیوتکنولوژی کشاورزی
نسرین مشتاقی
گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد
براتعلی مشکانی
گروه بیوشیمی دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی مشهد
سعید ملک زاده شفارودی
گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد