کشت اولیه بافت های باله تاسماهی ایرانی و ذخیره سازی سلول های کشت یافته جهت تهیه تیره های سلولی (Cell line) و شناسایی سلول های بنیادی در آینده

در این تحقیق روش کشت بافت باله دمی تاسماهی ایرانی Acipenser persicus با استفاده از کشت تکه های بافتی بدست آمد. بدین منظور حاشیه باله دمی ماهیان 3-2 ساله را به اندازه تقریبی 2 سانتیمتر با رعایت شرایط استریل بریده،سه بار با محیط کشتL-15 دارای آنتی بیوتیک ها و ضد قارچ شستشو داده، سپس به تکه های 1 میلیمتری بریده و درمحیط کشتL-15 حاوی HEPES (mM 25)، آنتی بیوتیک ها، ضد قارچ و 20 درصد سرم جنین گاو (FBS) درانکوباتور 22 درجه سانتیگراد کشت داده شد. پس از تشکیل مقدار کافی لایه سلولی روی کف فلاسک، سلول ها باPBS حاوی آنتی بیوتیک ها شستشو داده شدند و توسط محلولTrypsin-EDTA (25/0 درصد) و تکان دادن فلاسک از کف فلاسک جدا شدند. پس از افزودن FBS و شستشوی سلول ها با محلول PBS حاوی آنتی بیوتیک ها وضد قارچ، سلول ها به یک فلاسک جدید حاوی 5 میلی لیتر محیط کشت L-15، 20 درصد FBS، آنتی بیوتیک هامنتقل و در انکوباتور22 درجه سانتیگراد قرار داده شد (ساب کالچر اول). پس از گذشت 48 ساعت، چسبیدن تقریبا 75% سلول ها به کف فلاسک و تکثیر آنها مشاهده شد. پس از تشکیل یک لایه سلولی، سلول ها دوباره کشت داده شدند (ساب کالچر دوم). در این تحقیق از محیط کشت هایM199 ،DMEM/F12 ،10 و 15 درصد سرم جنین گاو و دماهای20 و 25 درجه سانتگیراد نیز استفاده شد. تکه های بافت تغذیه شده با محیط کشت L-15رشد خوبی را نشان دادند ولی در سایر محیط کشت ها رشد نیافتند. بیشترین تکثیر سلولی در محیط کشت L-15 دارای 20 درصد سرمجنین گاو و دمای 22 درجه سانتیگراد اتفاق افتاد. در بین سلول های حاصل از کشت اولیه، سلول های شبه فیبروبلاست و شبه اپی تلیال مشاهده شد و در سلول های حاصل از کشت های بعدی سلول های شبه فیبروبلاست بیش از سلول های شبه اپی تلیال بودند. واژه های کلید : دریای خزر، تاسماهی ایرانی، Acipenser persicus ، کشت بافت، باله دمی