جداسازی و مشخصه یابی وزیکولهای برون سلولی از نمونه خون انسان: یک روش امیدبخش در بیوپسی مایع

اهداف: وزیکول­های خارج سلولی، تقریباً توسط تمامی سلول­های بدن ترشح می­شوند و حاوی بیومارکرهای ارزشمندی هستند که می­توان از آن در جهت تشخیص زودهنگام انواع بیماری­ها بخصوص در حوزه سرطان بهره برد. نیاز به یک متد تشخیصی سریع و کارآمد با قابلیت کمیت سنجی EVs جداسازی شده که در عین حال قابل اجرا در شرایط کمبود تجهیزات آزمایشگاهی و غیرتهاجمی باشد، می­تواند از جمله ضروریات در جهت پیشبرد مطالعات تشخیصی مبتنی بر EVs باشد. هدف از تحقیق حاضر ارئه روش نسبتا سریع و کارامد به منظور جداسازی EVs از خون به عنوان یک مایع بیولوژیک مهم در انسان است. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی با تلفیق دو روش کروماتوگرافی مبتنی براندازه و سانتریفیوژ دور بالا،  EVsدر طی یک ساعت با موفقیت از پلاسما انسان جداسازی شدند. جهت تائید فرایند جداسازی مطابق با معیارهای مایسیو، سه پروتئین غشایی تتراسپینن CD63، CD81،CD9  و یک پروتئین لومنال TG101 به عنوان شاخص های پروتئینی مثبت و پروتئین کانکسین به عنوان مارکر منفی به کمک وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفتند. یافته‌ها: حضور حداکثری مارکرهای مثبت و عدم حضور مارکر منفی در فرکشن­های 7 الی 9 تائید شد. علاوه بر این، توزیع اندازه آنها به کمک تکنیک DLS با میانگین قطر در محدوده ۱۰۰ نانومتر صورت گرفت. کمیت‌سنجی مقدار محتوای پروتئینی EVs نیز با سنجش BCA انجام شد. نتیجه‌گیری: تحقیق حاضر مبین آن است که تلفیق روش‌های سانتریفیوژ دور بالا و کروماتوگرافی مبتنی بر اندازه به منظور جداسازی EVs از پلاسمای خون افراد بسیار کارامد است.

Keywords:

Extracellular vesicles , Isolation , Biomarkers , Size exclusion chromatography , وزیکولهای خارج سلولی , جداسازی , نشانگر , کروماتوگرافی مبتنی براندازه , پراکندگی نور پویا