تکثیر و همسانه سازی ژن سه قسمتی lsc در وکتور pcDNA۳.۱ و بررسی بیان آن در لاین سلولی
Publish place: New Cellular Biotechnology - Molecular، Vol: 11، Issue: 42
Publish Year: 1399
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 360
This Paper With 12 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_NCMBJ-11-42_006
تاریخ نمایه سازی: 20 تیر 1400
Abstract:
سابقه و هدف: اسهال دومین عامل رایج مرگ و میر کودکان زیر ۵ سال است. مهمترین سویههای بیماریزایی اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک با تولید سم Lt و St موجب بیماری اسهال مسافران و اشریشیاکلی انتروهموراژیک با ترشح سم شبه شیگا موجب اسهال خونی میشود. زیرواحد B انتروتوکسین کلره در باکتری ویبریوکلرا در ایجاد بیماری اسهال نقش بهسزایی دارد.بهاحتمال با ترکیب اپی-توپهای CtxB، LtB و StB (LSC) و تولید واکسن تری والان میتوان آنتیبادی اختصاصی تری برای مقابله با این سموم ایجاد کرد. هدف از این تحقیق تکثیر ژن کایمر lsc جهت کلونینگ در وکتور pcDNA۳.۱(+) بهمنظور طراحی DNA واکسن و بررسی بیان در وکتور یوکاریوتیک است.
مواد و روش ها: توالی ژن lsc پس از طراحی پرایمر و تکثیر بهوسیله PCR به وکتورpcDNA۳.۱(+) منتقل شد. وکتور pcDNA۳.۱(+) و محصول PCR با استفاده از آنزیم HindIII و EcoRI مورد هضم قرار گرفت. کلونینگ ژن lsc در وکتورpcDNA۳.۱(+) و PCR انجام شد. کلونها مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. جهت اطمینان از بیان ژن lsc به سلول HEK-۲۹۳T منتقل و با استفاده از روش وسترن بلاتینگ مورد تایید قرار گرفت.
یافته ها: ژن lsc پس از PCR و کلونینگ در وکتورpcDNA۳.۱(+) با استفاده از هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت و قطعهای بهطول bp۹۳۳ رویت و تایید شد. سپس با استفاده از کیت توربوفکت به سلول HEK-۲۹۳T منتقل و بیان پروتئین نوترکیب به روش وسترن بلاتینگ مورد تایید قرار گرفت و پروتئین به وزن ۳۹ کیلودالتون تایید شد.
نتیجه گیری: نتایج بهدست آمده از ژن کایمر بهخوبی در لاین سلولی بیان و توسط وسترن بلاتینگ تایید شد که میتواند کاندید مناسبی برای مقابله با عفونت باکتریایی باشد.
Keywords:
Authors
سپیده ساروقی
Department of Genetics, Payam Noor University, Tehran, Iran
مریم زارع
Department of Biology, Payam Noor University , Tehran, Iran.
روح الله کاظمی
Green Gene Company, Tehran, Iran
جواد معتمدی
Green Gene Company, Tehran, Iran
جعفر امانی
Chemical Injuries Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :