بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس در باکتری اشریشیا کلای سویه BL۲۱(DE۳)
Publish place: Journal of Veterinary Research، Vol: 76، Issue: 2
Publish Year: 1400
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 273
This Paper With 9 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JVR-76-2_003
تاریخ نمایه سازی: 18 مهر 1400
Abstract:
زمینه مطالعه: توکسوکاریازیس یک بیماری مهم زئونوز است که توسط نوزاد مرحله دوم توکسوکارا کنیس و توکسوکارا کتی ایجاد می شود. در خیلی از کشورهای معتدل توکسوکاریازیس رایج ترین عفونت کرمی است و سبب بروز عوارض شدید می شود. لکتین نوع سی از محصولات تولیدی در مرحله نوزادی این انگل است. این پروتئین در واکنش های ایمنی ازجمله ارسال سیگنال سلول های ایمنی در مهره داران، فعال کردن ایمنی ذاتی در مهره داران و بی مهرگان و القا هموستاز دخالت دارد.هدف: مطالعه حاضر با هدف بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس و بررسی خواص آنتی ژنی (پادگنی) آن صورت گرفته است.روشکار: توالی نوکلئوتیدی مرجع مربوط به لکتین نوع سی(CTL) انگل توکسوکارا کنیس از بانک ژن استخراج شد. سپس پلاسمید pET۳۲a حاوی توالی مورد نظر توسط شرکت GENERAY سنتز گردید. پلاسمید نوترکیب به باکتری اشریشیا کلای سویه BL۲۱(DE۳) منتقل شد. بیان این پروتئین با استفاده از روش های SDS-PAGE و داتبلات بررسی و با سرم انسانی مثبت، مورد تایید قرار گرفت.نتایج: مطالعه حاضر نشان داد که بهینه سازی شرایط برای دستیابی به بیشترین میزان تولید پروتئین با انتخاب باکتری اشریشیا کلای سویه BL۲۱(DE۳)، دمای ۳۷ درجه سانتی گراد پس از القا و غلظت ۱ میلی مولارIPTG حاصل گردید. پس از بهینه سازی پروتئین نوترکیب با غلظت ۶/۰±۱۱۶۰میکروگرم بر میلی لیتر استخراج شد. وزن مولکولی پروتئین حاصل ۴۲ کیلودالتون بود. پاساژ پلاسمید نوترکیب قبل از القا، در باکتری اشریشیا کلای سویه DH۵α باعث افزایش معنی دار بیان پروتئین گردید. نتایج ارزیابی بهینه سازی شرایط، با روش های SDS-PAGE و دات بلات نشان داد که بیشترین میزان تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس در شرایط بهینه سازی حاصل شده است.نتیجهگیری نهایی: جهت تولید هر پروتئین نوترکیب به ویژه در مقادیر زیاد و به منظور مصارف تجاری لازم است که بهینه سازی مخصوص آن پروتئین، انجام شود و دقیقا براساس شرایط بهینه سازی تعیین شده، تولید پروتئین نوترکیب قابل انجام است. نتایج مطالعه حاضر نشان داد که شرایط بهینه جهت تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی، انتخاب باکتری اشریشیا کلای سویه BL۲۱(DE۳)، دمای ۳۷ درجه سانتی گراد و مدت زمان ۴ ساعت پس از القا است که با حفظ ویژگی های ایمنی زایی نیز همراه است. به طورکلی می توان چنین نتیجه گیری کرد که سویه باکتری انتخاب شده و همچنین دما و زمان القا بر میزان بیان و تولید پروتئین های نوترکیب مانند لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس تاثیر مستقیم دارد.
Keywords:
توکسوکارا کنیس , پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی , باکتری اشریشیا کلای سویه BL۲۱(DE۳) , باکتری اشریشیا کلای سویه BL۲۱ , پلاسمید pET۳۲a
Authors
مهسا شه بخش
گروه انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
فاطمه جالوسیان
گروه انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
سیدحسین حسینی
گروه انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
پرویز شایان
گروه انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
عبدالرضا ناصر مقدسی
مرکز تحقیقات ام اس، پژوهشکده علوم و اعصاب، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :