طراحی و ساخت کاست رمزکننده عامل رشد اپیدرمی انسانی برای بیان در بذر گیاه جو

هدف: گیاهان کارآیی بسیاری در تولید پروتئین های ارزشمند دارویی دارند. عامل رشد اپیدرمی انسانی، اثرات بی شماری بر روی سیستم های مختلف سلولی داشته و نقش مهمی در بهبودی زخم ها و اندام زایی دارد. هدف از پژوهش اخیر ساخت سازه های ویژه تک لپه ای ها برای انتقال بعدی ژن عامل رشد اپیدرمی و تولید انبوه آن در یک گیاه تک لپه ای خودگشن یعنی جو بود. گیاه جو با داشتن عملکرد پروتئینی بالا و دگرگشنی بسیار پایین، میزبان ایده الی برای تولید عامل رشد اپیدرمی است. مواد و روش ها: به منظور دسترسی به بالاترین میزان بیان عامل رشد اپیدرمی در بذر جو، توالی ژن موردنظر بر اساس ترجیح کدونی گیاه جو با نرم افزار COOL بهینه و همراه با پیش بر اختصاصی دی هوردئین سنتز شد. همچنین توالی راهنمای پپتیدی اندامک ذخیره ای پروتئین در بذر جو در ابتدای ناحیه رمزکننده قرار گرفت. پس از دریافت قطعه سنتزی در ناقل pUC۵۷Hvorhegf، آن قطعه توسط آنزیم های SacI و HindIII از ناقل جدا و در پلاسمید pBI۱۲۱ همسانه سازی شد. در گام بعدی همسانه سازی، برای درج توالی ژن موردنظر در ناقل pGH۲۱۵، به دلیل نبود جایگاه های شناسایی یکسان در این ناقل ها، از ناقل حدواسط pBI۱۲۱Gus-۱۲ استفاده شد. بعد از برش ناقل همسانه سازی و pBI۱۲۱Gus-۱۲ توسط آنزیم های SacI و KpnI، همسانه سازی قطعه موردنظر در pBI۱۲۱Gus-۱۲ انجام گرفت. در گام آخر، ناقل pBI۱۲۱G-۱۲Hvorhegf و pGH۲۱۵ با آنزیم های KpnI و SalI هضم شده و توالی موردنظر در مرز راست T-DNA و قبل از پایان دهنده NOS قرار گرفت. نتایج: با استفاده از آزمون کلونی پی سی آر، الگوی هضم آنزیمی و توالی یابی با آغازگرهای رفت وبرگشت، درستی همسانه سازی و تولید ناقل های pBI۱۲۱Hvorhegf واجد ژن hegf با نشانگر کانامایسین و pGH۲۱۵Hvorhegf واجد ژن hegf با نشانگر هیگرومایسین، مناسب برای انتقال ژن در تک لپه ای ها تائید شد. نتیجه گیری: ناقل بیانی نوترکیب pGH۲۱۵ تغییریافته دارای کاست ژنی موردنظر همراه با نشانگر هیگرومایسین می تواند برای انتقال ژن موردنظر در تک لپه ای ها و بیان پروتئین نوترکیب در اندام ذخیره ای بذر استفاده شود.

طراحی و ساخت کاست رمزکننده عامل رشد اپیدرمی انسانی برای بیان در بذر گیاه جو Keywords:

اگروباکتریوم تومه فاشینس , تک لپه ای , همسانه سازی