ساکارومایسس سرویزیه در مخمر پیکیا پاستوریس و بررسی PDIبیان ژن در این مخمرCD۲۲بر علیهScFV اثر آن بر بازده تولید پروتئین

scFv یکی از معروفترین قطعات حاصل از آنتی بادی است که از یک ناحیه متغیر زنجیره سنگین و یک ناحیه متغیر زنجیره سبک تشکیل شده است و دارای کاربرد های درمانی و تشخیصی متعددی است. scFv به صورت نوترکیب اولین بار در میزبانهای پروکاریوتی نظیر E. coli و یوکاریوتی نظیر مخمر و سلول های mammalian تولید شده است. گزارشات حاکی از توانائی بالقوه مخمر پیکیا پاستوریس در تولید این محصول است. فولدینگ دقیق پروتئین یک پروسه ی کاملا تنظیم شده است که با استفاده از آنزیم ها و پروتئین های چاپرون انجام می شود . پروتئین دی سولفید ایزومراز Protein Disulfide Isomerase (PDI)) )یکی از آنزیم های موجود در شبکه ی آندوپلاسمی با وزن ۵۸کیلودالتون است و از پروتئین های ضروری در یوکاریوت ها می باشدکه از تجمع باند های دی سولفیدی غیر طبیعی و در نتیجه ایجاد فرم های غیر فعال جلوگیری می کند.بعلاوه این پروتئین بعنوان چاپرون ملکولی عمل می کند. در این مطالعه به بررسی اثر بیان بیش از حد PDI ( overexpression) بر روی تولید ScFV نوترکیب در میزبان مخمری پیکیا پاستوریس پرداخته شده است. برای این منظوراز وکتور بیانی pHIL-D۲ که حاوی پروموتور قوی AOX می باشد استفاده شده است. برای انجام این تحقیق سازه حاوی PDI وارد مخمر نوترکیب پیکیا پایتوریس واجد سازه بیانیScFV شد و بیان همزمان دو سازه با استفاده از متانول القا گردید. سپس اثر بیان PDI بر روی بازده تولید پروتئین scFvبا استفاده از SDS-PAGEو Western Blot گرفت.

Keywords:

ScFv , PDI قطعات آنتی بادی , پیکیا پاستوریس , چاپرون ها