زیرهمسانه سازی و بیان ژن ممزوجی M L۱-stxB دارواش در E. Coli و تولید آنتی بادی آن در موش سوری

زمینه و هدف: عصاره برگ های دارواش (Viscum album L) دارای پروتئین MLI از نوع RIP۲ (پروتئین های غیرفعال ریبوزومی تیپ ۲) با خواص لکتینی هستند. STxB شیگا توکسین به عنوان یک ایمونواجوانت و حامل، مطرح بوده و به گیرنده سطح سلولی خود به نام Gb۳ متصل می گردد که روی اکثر سلول های بدن بیان می شود. در این مطالعه، بیان آنتی ژنML۱-stxB  در E. coli و تولید آنتی بادی آن در موش سوری بررسی گردید. روش بررسی: در این مطالعه تجربی، پلاسمید pUC۵۷ حاوی ژن MLI با جایگاه های آنزیمی NdeI و SalI در وکتور بیانی pET۲۸a(+)-stxB، زیرهمسانه سازی شد و به باکتری E. coli سویه BL۲۱(DE۳) تراریخت (ترانسفورم) گردید. بیان کاست ژنی MLI-StxB تحت القایIPTG  انجام گرفت. پس از تخلیص، پروتئین نوترکیب MLI-STxB به وسیله ستون نیکل کروماتوگرافی در چهار نوبت متوالی به موش های سوری تزریق شد. یافته ها: در این مطالعه، ژن ML۱-stxB کلون شده در وکتور بیانی pET۲۸a(+)، با واکنش PCR و آنالیز آنزیمی تایید گردید. همچنین پروتئین نوترکیب تولیدشده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن مورد تایید قرار گرفت، سپس آنتی بادی تولیدشده از سرم موش جداسازی و با روش تست ELISA بررسی گردید. نتیجه گیری: براساس نتایج این مطالعه، پروتئین ML۱ دارای خاصیت غیرفعال کننده ریبوزومی و STxB نقش یاوری و حاملی دارد؛ لذا این پروتئین نوترکیب، کاندیدای واکسن علیه سم دارواش شیگلا دیسانتری بوده که از آنتی بادی آن می توان به عنوان شناساگر استفاده کرد.

Keywords:

Escherichia coli , Subcloning , Shigella , Mistletoe Lectin , اشرشیاکلی , زیرهمسانه سازی , دارواش , شیگلا.