بررسی نقش محافظتی کوئرستین بر حیات سلول های نرمال تخمدان مواجه شده با داروی کلومیفن سیترات و ارتباط با بیان ژن p۵۳

سابقه و هدف: ناباروری، یکی از مشکلات عدیده پزشکی در دنیای امروز است. داروی کلومیفن سیترات برای درمان ناباروری استفاده می شود. از عوارض این دارو ایجاد بافت توموری در تخمدان می باشد. کوئرستین یک فلاونوئید است که به طور فراوان در طبیعت یافت می شود. کوئرستین در بسیاری از میوه ها، سبزیجات، برگ ها، دانه ها و غلات یافت می شود. کوئرستین، پتانسیل استفاده در درمان سرطان را دارد. شناخته شده ترین و شایع ترین ژن سرکوبگر تومور در انسان، ژن p۵۳ است. ژن p۵۳ در سال ۱۹۷۹ کشف شد و در سال ۱۹۸۹ به عنوان یک ژن مهارکننده تومور شناخته شد. این ژن در سال ۱۹۹۲ به دلیل نقشی که در حفظ ثبات ژنوم داشت به عنوان نگهبان ژنوم شناخته شد. ژن p۵۳ متداول ترین ژن جهش یافته در سرطان های انسان است. این مطالعه با هدف بررسی نقش محافظتی کوئرستین بر حیات سلول های نرمال تخمدان مواجه شده با داروی کلومیفن سیترات و ارتباط با بیان ژن p۵۳، انجام پذیرفت. مواد و روش ها: در این مطالعه آزمایشگاهی مداخله ای و از نوع کار تحقیقاتی از نوع کاربردی، از سلول های نرمال تخمدان رده ی سلولیCHO استفاده شد. غلظت های ۱۰۰۰، ۵۰۰، ۱۰۰، ۵۰، ۱۰ میلی گرم بر میلی لیترکوئرستین و ۵۰ میکرومولار داروی کلومیفن سیترات و ۲۹/۰ میکروگرم بر میلی لیتر سیس پلاتین تهیه و به مدت ۲۴ ساعت به سلول های کشت داده شده اضافه شد. در این مطالعه داروی کلومیفن سیترات و داروی سیس پلاتین هر دو به عنوان کنترل مثبت می باشند. ارزیابی حیات سلول ها به روش MTT assay انجام شد. ابتدا RNA استخراج و سپس بیان ژن p۵۳ با دستگاه Real-Time PCR مورد بررسی و آنالیز قرار گرفت. در این مطالعه آغازگر مورد استفاده برای ژن p۵۳ با استفاده از سایت های NCBI و primer۳ طراحی شد. در این مطالعه ژن کنترل داخلی GAPDH می باشد. یافته ها: نتایج این مطالعه نشان داد که غلظت های ۱۰۰۰، ۵۰۰، ۱۰۰، ۵۰ میلی گرم بر میلی لیتر کوئرستین با کاهش سمیت داروی کلومیفن سیترات و داروی سیس پلاتین (هر دو به عنوان کنترل مثبت) باعث افزایش حیات سلولی می شود به طوری که هر چه غلظت کوئرستین بیش تر شد، تعداد سلول های زنده بیش تر می شود و در غلظت ۱۰۰۰ میلی گرم بر میلی لیتر کوئرستین تعداد سلول های زنده به ۸۳ درصد رسید. نتایج حاصل از آزمون Real-time PCR بیانگر آن است که، کوئرستین به طور معنی داری باعث افزایش بیان ژن p۵۳ در مقایسه با گروه کنترل مثبت (داروی کلومیفن سیترات) و کنترل منفی شد (p<۰/۰۵). در غلظت های ۵۰۰ (۰/۰۰۲۰=P) و ۱۰۰۰ (p<۰/۰۰۰۱) کوئرستین در مقایسه با داروی کلومیفن سیترات، این افزایش بیان چشمگیرتر بود. هم چنین در غلظت های ۵۰۰ (p<۰/۰۰۰۱) و۱۰۰۰ (p<۰/۰۰۰۱) کوئرستین در مقایسه با کنترل منفی، افزایش بیان چشمگیری در ژن p۵۳ مشاهده شد. استنتاج: یافته های حاصل از این بررسی نشان داد که، کوئرستین احتمالا باعث مهار سمیت سلولی حاصل از داروی کلومیفن سیترات و افزایش میزان بیان ژن p۵۳ می شود و میزان اثربخشی آن وابسته به دوز می باشد. بنابراین مطالعه حاضر تا حدی می تواند بیان کننده نقش کوئرستین در فرآیند مهار تومورزایی در گسترش سرطان در سلو ل های نرمال تخمدان باشد.

Keywords:

Normal ovarian cell , Clomiphene citrate , Flavonoid , Quercetin , Cisplatin , p۵۳ gene , tumorigenesis , سلول نرمال تخمدان , کلومیفن سیترات , فلاونوئید , کوئرستین , سیس پلاتین , ژن p۵۳ , تومورزایی