بررسی بیان ژن های دخیل در ایمنی ذاتی در سلول های ماکروفاژ انسانی در مواجهه با باکتری مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

سابقه و هدف: یکی از اهداف سلولی اولیه مایکوباکتریوم ها، ماکروفاژها هستند که باکتری استراتژی های مختلفی برای زنده ماندن و تکثیر در داخل فاگوزوم ها از جمله مانند ممانعت از اسیدیفیکاسیون فاگوزوم و ممانعت از ادغام فاگوزومی دارند. از طرفی اهمیت polarization و plasticity ماکروفاژها در مواجهه با عوامل عفونی، بین ماکروفاژهای M۱ و M۲ کاملا شناخته شده است. باتوجه به نقش دو ژن DUSP۱۴ و RAP۲A در فرایندهای ایمنی ذاتی، هدف از این مطالعه بررسی بیان این ژن ها در ماکروفاژهای افراد سالم آلوده شده با سویه های PB۸، H۳۷Rv و MTBRils است تا بتوان درک جامع تری از چگونگی عملکرد ایمنی ذاتی به دست آید. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، پنج فرد سالم که نتیجه تست PPD آن ها منفی بوده است و سابقه ابتلا به بیماری سل را نداشتند انتخاب شدند. سپس PBMC ها با استفاده از گرادیانت فایکول جدا شده و با دستگاه Cell Counter تعداد سلول های موجود در رسوب شمارش گردید در ساخت محیط کشت به ازای ۵۰۰ میلی لیتر محیط stem span، ۲ میلی لیتر لیپید کلسترول و ۵ میلی لیتر (۱۰x) Pen/Strep به محیط اضافه شد و پس از ۹ روز در محیط کشت غنی شده، تمایز و در نهایت بیان ژن های DUSP۱۴ و RAP۲A پس از مواجهه با سه سویه PB۸، H۳۷Rv و MTBRils طی ۴، ۱۸ و ۴۸ ساعت پس از آلوده کردن سلول ها در محیط کشت، با روش ریل تایم بررسی گردید. بدین صورت که در ابتدا mRNA از محیط استخراج شد و از روی آن cDNA ساخته شد و PCR با مسترمیکس Takara صورت پذیرفت. جهت اندازه گیری میزان نسبی بیان تک تک ژن ها از روش -ΔΔ Ct۲ استفاده شد. به همین منظور میزان بیان هر ژن در مقایسه با ژن رفرنس برای هر بیمار در سه مرحله بررسی شد. جهت بررسی آماری از نرم افزار SPSS نسخه ۲۲ و GraphPad Prism نسخه ۸ استفاده شد. یافته ها: نتایج نشان داد که ۴ ساعت پس از تیمار سلول ها با سویه H۳۷Rv بیان ژن RAP۲A نسبت به دو سویه دیگر بیان بیش تری داشته است، اگر چه افزایش بیان معنی دار نیست. هم چنین بیان ژن DUSP۱۴ در ۴ ساعت پس از آلوده شدن با همه سویه ها اگرچه افزایش معنی داری پیدا نکرد؛ اما در سویه PB۸ افزایش بیان بیش تری نسبت به سویه های دیگر داشت. در این مطالعه نشان داده شد که بیان ژن RAP۲A پس از گذشت ۴۸ ساعت از آلودگی ماکروفاژها، سویه های H۳۷Rv و MTBRils نسبت به PB۸ و گروه کنترل کاهش نشان داد. بیان ژن DUSP۱۴ نیز در همه زمان ها در گروه H۳۷Rv و MTBRils نسبت به PB۸ و گروه کنترل کاهش معنی داری دیده شد. استنتاج: کاهش بیان ژن RAP۲A در دو سویه مایکوباکتریوم H۳۷Rv و MTBRils نشان می دهد مایکوباکتریوم توبرکلوزیس با کاهش فعالیت GTPase، سعی در اختلال در روند فاگوزوم و شیفت پاسخ ها به سمت ماکروفاژهای M۲ دارد. مطالعات آتی بر روی نقش پلی مورفیسم های ژن های RAP۲A و DUSP۱۴ توصیه می گردد.

بررسی بیان ژن های دخیل در ایمنی ذاتی در سلول های ماکروفاژ انسانی در مواجهه با باکتری مایکوباکتریوم توبرکلوزیس Keywords:

mycobacterium tuberclosis , gene expression , innate immunity , RAP۲A gene , DUSP۱۴ gene , مایکوباکتریوم توبرکلوزیس , بیان ژن , ایمنی ذاتی , ژن RAP۲A , ژن DUSP۱۴