پایش سمیت سرب به وسیله زیست حسگر لوسیفراز رده سلولی Huh۷-۱x-ARE-luc

اهداف: تجمع رادیکال های آزاد در بدن با ایجاد استرس اکسیداتیو منجر به تخریب پلیمرهای زیستی می شود. به دلیل ورود فلزات سنگین به محیط های آبی و خاکی، یافتن روش های کارآمد برای شناسایی و اندازه گیری میزان فلزات سنگین لازم است. زیست حسگرهای سلولی می توانند در حضور یک محرک از جمله فلزات سنگین، سیگنالی قابل اندازه گیری تولید کنند. در این تحقیق رده سلولی Huh۷-۱x-ARE-luc تحت کنترل پروموتر حساس به حضور اکسیدان ها با هدف پایش سرب استفاده شد و کارآیی آن در سنجش سمیت این مواد به واسطه آرمایش های لوسیفراز و Real time-PCR بررسی شد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، بعد از ترنسفکشن وکتور نوترکیب سنجش فعالیت ژن لوسیفراز در نمونه های تیمارشده با سرب انجام شد. تعدادی از کلون های تاییدشده با فنوتیپ پایدار بعد از پاساژ پنجم برای بررسی بیان ژن لوسیفراز در غلظت های صفر تا ۸۰ماکرومولار از سرب بررسی شدند. سپس قابلیت مهارکنندگی به روش assay MTT  و تغییرات بیان ژن های مسیر اکسیداتیو توسط Real time-PCR بررسی شد. تحلیل های آماری با روش ∆Ct و با استفاده از نرم افزار graphpad prism ۶ انجام شد. یافته ها: میزان بیان ژن گزارشگر همراه با افزایش ماده اکسیداتیو افزایش یافت. کاهش بیان ژن گزارشگر بعد از غلظت ۳۰ماکرومولار سرب قابل مشاهده بود. غلظت ۳۵ماکرومولار سرب، متابولیسم ۵۰% سلول ها را مهار کرد. بیان ژن های مسیر آنتی اکسیدانی در سلول های تیمارشده با سرب ۳۰ماکرومولار نسبت به ژن کنترل، افزایش معنی داری داشت. نتیجه گیری: زیست حسگر تهیه شده از رده سلولی نوترکیب Huh۷-۱x-ARE-luc حامل ژن گزارشگر می تواند وسیله مناسب و کارآمدی برای سنجش ترکیبات اکسیداتیو همچون فلزات سنگینی چون سرب باشد.

پایش سمیت سرب به وسیله زیست حسگر لوسیفراز رده سلولی Huh۷-۱x-ARE-luc Keywords:

Reporter Gene , Biosensor , Oxidative Stress , Antioxidant Response Element , ژن گزارشگر , زیست حسگر , استرس اکسیداتیو , توالی پاسخگوی آنتی اکسیدانی