کلونینگ و بیان دومین III پروتئین E ویروس تب دانگ در میزبان باکتریایی

مقدمه: ویروس دانگ باعث بروز تب حاد، تب خونریزی دهنده، سندرم شوک دانگ و حتی مرگ در انسان می وشد. هنوز دارو یا واکسن تأئید شده ای علیه این بیماری ایجاد نشده است. پروتئین پوششی E ویروس بعنان کاندید واکسن مورد توجه است. این پروتئین در ویژگیهای حیاتی ویروس مانند شناسایی گیرنده، الحاق غشایی، القای آنتی بادی های خنثی کننده و ایمنی محافظتی، ن قش اصلی را ایفا می کند. پروتئین E حاوی سه دومین II, I و III می باشد که دومین III نقش اساسی در ویژگیهای فوق دارد. هدف: هدف این مطالعه ایجاد آنتی زن نوترکیبی از پروتئین E سروتیپ 1 ویروس، به منظور دستیابی به کاندید واکسن دانگ است. بنابراین، قابلیت تولید دومین III این پروتئین در باکتری مودر بررسی قرار گرفت. روشها: همردیفی توالیهای مربوط به دومین III با نرم افزار Megalign،پیشینی ساختارهای سه گانه پروتئین با نرم افزارهای PSIpred, EditSeq و Modeller. پیش بینی اپیتوپها با نرم افزارهای Bcepred و discotop بهینه سازی توالی ژن برای بیان در E.coli با نرم افزار Optimizer. سنتز و کلونینگ ژن در وکتور بیانی pET21. انتقال وکتور به میزبان بیانی و بهینه سازی بیان پروتئین. نتایج: توالی آمینواسیدی حاصل (بنام EDIII1) با روشهای ایمونوانفورماتیک بررسی شد. سپس ساختار اول، دوم و سوم پروتئین پیش بینی شد. ا پیتوپهای خطی و فضایی مورد انتظار توسط روشهای معتبر تعیین شدند. به منظور بیان حداکثری پروتئین نوترکیب در باکتری، توالی ژن از لحاظ الگوی کدونی و درصد GC بهینه سازی شد. ژن هدف پس از سنتز، در وکتور بیانی pET21 در جایگاههای Ndel و Xhol کلون شد. به منظور ایجاد پیوند دیسولفیدی در ساختار پروتئین، بهینه سازی بیان EDIII1 در میزبان بیانی Origami انجام شد.

Keywords:

ویروس دانگ , پروتئین EDIII1 , E