تراریزش عامل رونویسی از خانواده (At3G12912)NAC در ناقل القایی pER8 به آرابیدوپسیس ((Arabidopsis thaliana) و ارزیابی بیانی گیاهان تراریخت در دو نسل

پیری یک فرآیند نموی طبیعی در گیاه است که با تغییر در بیان بسیاری از ژنها از جمله کاهش بیان ژنهای SDGs و افزایش بیان ژنهای SAGs همراه است. عوامل رونویسی در تنظیم بیان این ژنها نقش کلیدی دارند که عمده عوامل رونویسی تنظیم کننده پیری در خانواده NACs قرار می گیرند. ژن (ORE1(ANAC092 یکی از اعضای این خانواده است که نقش کلیدی آن در پیری آرابیدوپسیس محرز شده است. داده های بیوانفورماتیکی این فرض را متور می سازند که یکی از اعضای دیگر این خانواده با شناسه At3G12910 در بالادست ORE1 قرار گرفته است. هدف از اجرای این تحقیق انتقال سازه القایی At3G12910-pER8 به آرابیدوپسیس و بررسی القای این ژن تحت تیمار استرادیول در گیاهان تراریخت بود. لذا تراریزش گیاه آرابیدوپسیس تالیانا توسط باکتریهای Agrobacterium tumefaciens واجد سازه مورد نظر به روش نفوذ در مرحله غنچه دهی انجام شد. سپس بذور جمع آوری شده و پس از ضدعفونی بر روی محیط کشت MS حاوی سااکرز و هیگرومایسین کشت شدند. گیاهچه های مقاوم به گلدان منتقل شدند و بعد از سه هفته از هر گیاه دو نمونه برگی تهیه و تحت تیمار استرادیول و اتانول (کنترل) قرار گرفت. سپس RNA از برگهای 5 ساعت تیمار شده استخراج شد و پس از حذف DNA ژنومی، cDNA تک رشته ای ساخته شد. آزمونهای لازم در خصوص کیفیت سنجی RNA و cDNA انجام شد. سپس pRTPCR با استفاده از آغازگرهای اختصاصی برای این ژن انجام شد. نتایج حاکی از القای شدید و فراوانی دهها برابری رونوشت مورد نظر در شرایط القایی بود. همین آمزایش به طور کامل بر روی گیاهچه های نسل بعد با سه زمان دو، پنج و ده ساعت تیمار نیز انجام شد که بر موفقیت کامل سازه مورد نظر در القای بسیار شدید بیان ژن At3G12912 صحه گذاشت.

Keywords:

عامل رونویسی , خانواده NAC , پیری , آنالیز بیان ژن