جداسازی و شناسایی ملکولی سویه های باسیلوس های تولید کننده سلولاز از خاک جنگل

سابقه و هدف: سلولز پلی ساکاریدی است که به فراوانی در طبیعت یافت می شود و به عنوان بهترین ذخیره کربوهیدرات برای تولید انرژی بیولوژیک به شمار می رود. سلولازهای باکتریایی و قارچی نقش مهمی در هیدرولیز سلولز و قابل استفاده کردن آن بازی می نمایند. اندوگلوکونازها پیوندهای بتا گلیکوزیدی ( 4→ 1 ) را در سلولز هیدرولیز و آنها را به گلوکز تبدیل می نمایند. هدف از این مطالعه جدا سازی و شناسایی سویه های جدید از جنس باسیلوس با قابلیت تولید آنزیم سلولاز از خاک بوده است. روش مطالعه : در این تحقیق تعداد 40 باکتری از خاک ها و جنگل های نواحی غرب مازندران با قابلیت تولید سلولاز در محیط کربوکسی متیل سلولز ( CMC agar ) و با استفاده از آزمایش Grams iodine جداسازی شدند. از طریق اندازه گیری قطر هاله سویه های با قابلیت تولید سلولاز زیاد انتخاب شدند. سپس بهینه سازی دمایی و زمانی روی سویه ها انجام گرفت. در مرحله بعد گونه های باکتریایی از طریق 16S rDNA sequencing شناسایی گردیدند. وزن مولکولی تقریبی آنزیم بوسیله رسوب دهی پروتئین و SDS-PAGE تع یین گردید. یافته ها: تمامی گونه های شناسایی شده بیشترین مقدار آنزیم را دمای 37 درجه سانتی گراد و در مدت 96 ساعت تولید می کردند. بیشترین تولید آنزیم متعلق به سویه Bacillus Subtilis جدا شده با u/ml 3.8 بوده است. همچنین وزن ملکولی سلولاز سویه Bacillus Subtilis جدا شده تقریبا 60 کیلو دالتون تعیین گردید. در مجموع این باکتریها به 5 سویه از 5 گونه Bacillus Cereus ،Bacillus Subtilis ، ,Bacillus Thuringiensis Bacillus megaterium و Bacillus mycoides تعلق داشتند. نتایج: مطالعات ما پتانسیل بالا باسیلوس های نواحی جنگلی شمال کشور در تولید آنزیم سلولاز را نشان می دهد بطوریکه میتوان از این باکتریها مستقیما در تولید شربت گلوکز از فیبرهای گیاهی کم ارزش و استفاده در سایر صنایع بهره گرفت.

Keywords:

شناسایی ملکولی , باسیلوس ها , سلولازها