اعتبار سنجی عملکرد ریزRNAمصنوعی طراحی شده برای تضعیف بیان ژن کالومنین انسانی

بیماری هموفیلی یک بیماری خونریزی دهنده مغلوب وابسته به جنس است که در اثرکمبود فاکتور 9بوجود می آید. فاکتور 9 در طی بیوسنتز متحمل تغییرات بعداز ترجمه میشود که در این میان گاما-کربوکسیلاسیون در عملکرد پروتئین تاثیر کلیدی دارد. فرایند گاماکربوکسیلاسیون در نتیجه فعالیت دو آنزیم گاماکربوکسیلاز که به فرم احیا شده ویتامینK1(Vit.K1H2 بعنوان کوفکتور نیاز داردو ویتامینK12-3اپوکسیدردوکتازVKOR انجام می شود. محصول ژن کالومنین بازدارنده فرایند گاماکربوکسیلاسیون می باشدبنابراین تضعیف بیان ژن کالومنین میتواند موجب افزایش تولید فاکتور 9 فعال گردد.. در جانوران هدف قرار دادن یکmRNAبا استفاده از یک ریز(miRNA) RNAبه دلیل اینکه ریزmRNA و RNAهدف بطور کامل مکمل هم نیستند ارزیابی عملکرد آن مشکل است . ما در کار قبلی گروه دو ریزRNA ی مصنوعی بر علیه رونوشت ژن کالومنین انسانی طراحی کردیم و عملکرد آن را در کاهش بیان کلومنین در سلول های انیانی کشت شده نشان دادیم. از آنجایی که شواهدی مبنی بر تاثیر مستقیم ریزRNAی طراحی شده بر روی رونوشت ژن کالومنین در دست نمی باشد. لذا برای نشان داده عملکرد ریزRNAهای مصنوعی ضد کالومنین از تاثیر آن بر رونویسی و بیان یک ژن گزارش گر در حالی که توالی هدف آن در ناحیه غیر ترجمه ای ' 5 ژن گزارش گر قرار گرفته است، استفاده شد. با این هدفیک قطعه .... جفت بازی در برگیرنده توالی هدف دو ریز RNA مصنوعی پس از تکثیر در پائین دست ژن گزارشگر رنیلا در داخل وکتوربیانی قرار داده شد. پس از انتقال پلاسمید نوترکیب به میزبان مناسب و اندازه گیری کمی بیان ....... در حضور ریز RNA به منظور ارزیابی عملکرد ریزRNAها انجام خواهد گرفت.