بررسی روشی نوین در زمینه ی جداسازی طول کامل ژن

شناخت توالی ژن ها همواره بعنوان یکی از نیازمندی های اصلی در بسیاری از پژوهش ها مطرح بوده است و روش های متنوع اما زمان بری بدین منظور مورد استفاده قرار می گیرد. هدف از این مطالعه ارائه ی روشی ساده و کم هزینه در جهت بدست آوردن طول کامل ژن های مختلف می باشد. در مورد بسیاری از ژن ها می توان در نواحی درونی ژن پرایمر طراحی کرد و پس از تکثیر تعیین توالی نمود اماتوالی های انتهایی آن ناشناخته می ماند که با روش ارائه شده این مناطق نیز جهت تعیین توالی بدست می آیند. ژن آنزیم بتالاکتاماز موجود در سویه یStreptomyces hygroscopicusبا طولbp915 بعنوان ژن نمونه مورد استفاده قرار گرفت. محتوای ژنومی سویه ی مذکوراستخراج گشته و تحت تاثیر آنزیمSmaIهضم شد. پلاسمیدpUC19نیز بوسیله ی همین آنزیم بریده شده و قطعات هضم شده ژنوم باکتری وارد آن گشت. واکنشPCRبوسیله ی جفت پرایمر های شماره( 1)R و M13Fژن بتالاکتاماز و شماره ( 2)F و M13Rژن بتالاکتاماز صورت پذیرفت. پس از انجام ژل الکتروفورز محصولاتPCRقطعات تکثیر شده با پرایمر 1، باندی به طولbp1200 و در مورد پرایمر 2، باندی به طول 1700 تشکیل دادند. تعیین توالی این دو باند نشان داد که این توالی ها علاوه بر دارا بودن توالی میان دو پرایمر طراحی شده ی ژن، هر یک یک انتها از ژن را نیز دارا هستند. این مشاهده نشان داد که می توان از راهکار ارائه شده جهت یافتن طول کامل ژن بهره جست.

Keywords:

ژن , کلونینگ , توالی , بتالاکتاماز , PCR