ارزیابی یک روش کارآمد استخراجDNAآزاد جنینی از پلاسمای مادر

استفاده ازDNAازادجنینی cfDNA موجود در پلاسمای مادر یک روش غیر تهاجمی برای تعیین جنسیت جنین است. با توجه بهمبزان بسیار کمDNAآزاد جنینی در پلاسمای مادر اطمینان از کارآیی روش استخراجDNAبسیار مهم است. در این مطالعه ما یک روش استخراجDNA از پلاسما گوسفند را برای تعیین جنسیت جنین مورد ارزیابی قرار دادیم. دراین بررسی در مجموع 46 نمونه خونبا استفاده ازلوله های ونوجکت حاوی EDTAاز میشهای آبستن در طی دومین تا ماه پنجمین ماه بارداری جمع آوری شد. نمونه ها قبل از شروع مرحله جداسازی پلاسما در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری می شدند. 10 میلی لیتر از نمونه خون جهت جداسازی پلاسما سانتریفوژ شد. از 120 میکرولیتر پلاسما با استفاده از روش کمی تغییریافته فنل کلروفرم DNAاستخراج شد و در 20 میکرولیتر حلال حل گردید. از ژنSRYبرای تعیین میزان کمیcfDNAبا روشreal-time PCRمورد استفاده قرار گرفت و استخراج DNAمورد بررسی قرار گرفت . اگر چه مقادیر کمیcfDNAاز پلاسما بدست میآید ، ژنSRY با موفقیت در تمام 31 نمونه بابارداری جنین مذکر تشخیص داده شد. حساسیت و ویژگی آزمون 100 ٪ بدون نتایج منفی کاذب و مثبت کاذب بود. همچنین مشخص شد که سطح DNA جنین به میزان قابل توجهی در دوران بارداری افزایش می یابد (تا حدود 1,65 برابر در 2 ماه آخر بارداری) . با توجه کیتهای تجاری بسیار گران قیمت برای استخراجcfDNAاین روش دارای مزیت های بسیاری برای تحقیقات بر حیوانات است.

Keywords:

استخراجDNA , DNAآزاد جنینی , تشخیص جنسیت