روشی آزمایشگاهی و سریع برای تشخیص و رسوبدهی متابولیت های ثانویه درد سر ساز در استخراج DNA در گیاه دارویی آویشن

فن های مولکولی مختلف مانند PCR نیازمند DNA ژنومی جدا شده با خلوص مناسب می باشند فرایند استخراج DNA شامل جداسازی DNA از اجزا سلولی از قبیل پلی ساکاریدها و ترکیبات فنلی و به دنبال آن پروتئین زدایی از محلول آبکی شامل DNA، رسوب کردن و خالص سازی DNA می باشد مشکلی که عمدتا در طی استخراج رخ می دهد این است که این ترکیبات به شکل کمپلکس با اسیدهای نوکلئیک باند می شوند یکی از شناخته شده ترین گیاهان دارویی در طب سنتی ایران و اروپا ، آویشن با نام علمی Thymus از خانواده نعناعیان است دو گروه اصلی ترکیبات شیمیایی موجود در جنس آویشن ترپنوئیدها و فلاونوئیدها هستند این ترکیبات نقش اصلی را در اثرهای دارویی این گیاهان ایفا می کنند و گیاهانی که به گل رفته اند درصد زیادی از این مواد را دارا می باشند . DNA ژنومی از برگ گیاه آویشن که اکثرا به گل رفته بودند با چهار روش Doyle and Doyle ، Kang and Yang ،Dellaporta ، و Khanuja استخراج گردید و دیده شد که روش خانوجا از بقیه روش ها بهتر بوده که علت احتمالی آن اضافه کردن NaCl با مولاریته بالا در مرحله افزودن کلروفرم- ایزوآمیل الکل بوده که سبب رسوب چسبناک قهوه ای رنگی در محلول حاوی DNA گردید به طوری که در روش های دیگر این رسوب دیده نشد. بر این اساس این رسوب توسط آنالیزهای IR ،GC-Mass و طیف UV مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و مشخص شد که این رسوب شامل تیمول، کارواکرول، نرولیدول و بورنئول بودند که این مواد از جمله متابولیت های ثانویه گیاه آویشن می باشند در طیف GC بیشترین میزان را ماده تیمول دارا بود (63%) که مهمترین متابولیت ثانویه در آویشن می باشد همچنین این ماده اثر منفی در کیفیت و کمیت DNA استخراج شده می گذارد که روش خانوجا توانست این ماده را از رسوب DNA جدا کند لذا روش خانوجا جهت استخراج DNA گیاهانی که به گل رفته اند مناسب تر از سایر روش ها می باشد.

Keywords:

آویشن , استخراج DNA , متابولیت های ثانویه , IR , GC-Mass , طیف UV