اندازه گیری کپک آسپرژیلوس نایجر در رب گوجه فرنگی به روش Real Time

در این تحقیق از روش مولکولی Real Time PCR برای اندازه گیری کپک آسپرژیلوس نایجر در رب گوجه فرنگی استفاده شد. به دلیل مشکلات روش شمارش کپک ها به روش Howard Method Count از قبیل احتمال خطای آزمون کننده، دقت کم و عدم تکرار پذیری، تبیین یک روش استاندارد که بتواند با دقت و تکرار پذیری بالا تشخیص و شمارش کپک ها را امکان پذیر سازد ضروری به نظر می رسد. روش مولکوی Real Time PCR می تواند به عنوان یک روش مناسب برای شناسایی و اندازه گیری کمی دقیق کپک ها مطرح باشد که بر مبنای اندازه گیری مطلق و نسبی ژن های کپک های موجود می باشد. نمونه های رب گوجه فرنگی با مقادیر مختلف اسپور کپک ((1)10، (3)10 و (5)10) در هر گرم آلوده شد. پس از گرمخانه گذاری و رشد اسپور کپک و ایجاد میسیلیوم، استخراج DNA از هر نمونه با استفاده از روش al-sammari انجام شد. سپس با استفاده از واکنش Real Time PCR تعداد copy number مربوط به DNA کپک با استفاده از شناساگر سایبر گرین و پرایمرهای مربوط به جنس آسپرژیلوس نایجر تعیین شد. نتایج نشان داد که با افزایش مقدار DNA کپک در نمونه های شاهد و تلقیح شده منحنی Real Time در مقادیر (C(T کمتری به فاز لگاریتمی وارد می شوند. ضریب همبستگی خطی منحنی استاندارد در آزمون R(2)=0/938 Real Time بود که نشان دهنده دقت تعیین کمی این آزمون می باشد. اختصاصی بودن واکنش با استفاده از منحنی ذوب پرایمرها تعیین شد و نشان داد که واکنش به طور کاملاً اختصاصی انجام شده است.

Keywords:

آسپرژیلوس , نایجر , اندازه گیری , Real Time PCR