بیان دومین III پروتئین پوششی ویروس تب دانگ (سروتیپ 1) بهصورت نوترکیب

هدف: هدف این مطالعه ایجاد آنتی ژن نوترکیبی از پروتئین پوششی سروتیپ 1 ویروس، به منظور دستیابی به کاندیدای واکسندانگ است. بنابراین قابلیت تولید دومین III این پروتئین در باکتری بررسی شد. مواد و روش ها: به منظور دستیابی به یک توالی مورد توافق، هم ردیفی توالی های مختلف مربوط به دومین III با نرم افزارMegalign انجام شد . برای پیش بینی ساختار پروتئین از نرم افزار Modeller و برای بهینه سازی توالی ژن برای بیان در E.coli از نرم افزار Optimizer استفاده شد. پس از سنتز و کلونینگ ژن در وکتور بیانی pET21، انتقال وکتور و بهینه سازی بیان پروتئین در سویه بیانی E.coli انجام شد. برای تأیید بیان پروتئین نوترکیب از روش های استاندارد الکتروفورز پروتئین ها و لکه گذاری وسترن استفاده شد. یافتهها: یک توالی مورد توافق برای دومین III پروتئین پوششی سروتیپ 1 ویروس دانگ با استفاده از روش هم ردیفی چندگانه توالیهای مختلف به دست آمد که تحت عنوان EDIII نامیده شد . پیش بینی ویژگی های پروتئین هدف با روش های بیوانفورماتیک انجام شد . به منظور بیان حداکثری پروتئین نوترکیب در باکتری، توالی ژن از لحاظ الگوی کدونی و درصد GC بهینه سازی شد. همسانه سازی ژن هدف پس از سنتز، در وکتور بیانی pET21 در جایگاه های NdeI و XhoI انجام شد. به منظور ایجاد پیوند دی سولفیدی در ساختار پروتئین، بهینه سازی بیان EDIII1 در میزبان بیانی Origami انجام شد. در نهایت پس ازخالص سازی پروتئین هدف با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی، برای شناسایی آن از آزمون لکه گذاری وسترن استفاده شد.نتیجه گیری: نتایج این مطالعه کارایی سیستم بیانی باکتریایی را در بیان دومین III پروتئین پوششی ویروس دانگ نشان داد.

Keywords:

ویروس دانگ , پروتئین پوششی , واکسن