طراحی و ساخت وکتور نوترکیبmerBبه منظور پاکسازی زیستی جیوه آلی

متیل جیوه یکی از فرم های پایدار جیوه آلی است که میتواند وارد زنجیره غذایی موجودات زنده گردد و خطرات زیست محیطی جبران ناپذیری را برای اکوسیستم طبیعی بوجود آورد. پایداری جیوه و هزینه زیاد روشهای مرسوم پالایش عوامل نگران کنندهای هستند. در این رابطه، روش های بیولوژیکی مانند استفاده از بیوراکتورهای مبتنی بر باکتری ها یا آنزیم های آنها بعنوان یکی از روشهای میکروب پالایی راه حلی پایدار، کم هزینه و دوست دار محیط زیست ارایه می-دهد. در این پژوهش ژن merB از باکتری Serratia marcescens مناطق آلوده به جیوه جداسازی شده و سپس جهت کلونینگ در وکتور بیانی، با آنزیمهای NdeI / NcoI برش داده شد و پس از خالص سازی، به وکتور بیانی pET28a +الحاق صورت گرفت. وکتور نوترکیب pET28(a+)-merB به باکتری E.coliسویه TOP10 منتقل و در آن تکثیر شد. سپس روی کلنیهای رشد یافته درمحیط گزینشی کانامایسین واکنش زنجیره ای پلیمراز روی کلنی ها صورت گرفت. واکنش زنجیره ای پلیمراز روی پلاسمید با آغازگرهای اختصاصی ژن انجام و پس از تایید با هضم آنزیمی پلاسمید برای تعیین توالی ارسال شد. نتایج بهدست آمده صحت همسانه سازی ژن merBرا در وکتور بیانی نشان داد. این وکتور نوترکیب بهمنظور بیان پروتیین مورد نظر به باکتری E. coli سویه BL21 DE3منتقل و بیان پروتیین مورد نظر با کاربرد روش SDS-PAGE تایید شد. در نهایت عملکرد پروتیین MerBدر محیط حاوی جیوه بررسی و نتایج بیانگر افزایش مقاومت به جیوه در باکتری های نوترکیب بهدست آمده بود. به کمک این سیستم و با تولید آنزیمMerBمیتوان از طریق روشهای مختلف زیست پالایی اقدام به پاکسازی جیوه از مناطق آلوده نمود

Keywords:

جیوه , ژن کاهنده جیوه آلی , وکتور نوترکیب