مقایسه بیان ژن نوکلیوکپسید ویروس پژمردگی لکه ای گوجه فرنگی در دو سویه باکتری E. Coli

از آنجایی که روش های تولید آنتی بادی برای کاربرد در ویروس ها دارای محدودیت هایی می-باشد، بیان پروتیین پوششی در سیستم پروکاریوتی به منظور تولید آنتیژن انجام میشود. در پژوهش حاضر ژن نوکلیوکپسید ویروس پژمردگی لکه ای گوجه فرنگی از یک جدایه بومی در ایران تکثیر شده و پس از همسانه سازی، قطعه مربوط به ژن نوکلیوکپسید در سازه pTG19TSWV-N با آنزیم های BamHI و XhoI خارج شد و در حامل بیانی pET32a(+) برش یافته با آنزیم های BamHI و XhoI همسانه سازی شد. سپس، سازه pET32TSWV-N به سویه های BL21(DE3) و BL21(DE3) pLysS از باکتری E. coli انتقال یافت. بیان ژن نوکلیوکپسید با استفاده از القای پیشبر با غلظت یک میلیمولار IPTG در هر دو سویه صورت گرفت. چهار ساعت پس از القا، محیط های کشت باکتریایی جمعآوری شدند و محتوای پروتیینی استخراج شده از دو سویه مذکور در الکتروفورز عمودی بررسی شدند. با توجه به وزن مولکولی پروتیین بیان شده به همراه برچسب-هایی که از پلاسمید به پروتیین اضافه شده بود، پروتیینی به اندازه حدود 48 کیلودالتون در الکتروفورز عمودی مشاهده شد. نتایج این تحقیق حاکی از بیان ژن نوکلیوکپسید در دو سویه مذکور بود در حالیکه بیان پروتیین در سویه باکتریایی BL21(DE3) pLysS نسبت به BL21(DE3) بیشتر بود.

Keywords:

بیان , بیان پروکاریوتی , پروتیین نوترکیب , ویروس پژمردگی لکه ای گوجه فرنگی