دستیابی به دانش فنی و ساخت کیت تشخیص سریع بیماری نکروز عصبی ویروسی (Viral Nervous Necrosis) ماهیان با استفاده از روش ایمونو کروماتوگرافی

تشخیص سریع بیماری و حذف سریع ماهیان آلوده در مراحل اولیه بیماری امری ضروری برای کنترل موثر شیوع بیماری در محیط های محصور دریایی و نیز مزارع آبزی پروری است. هدف اساسی در این تحقیق طراحی و تهیه یک روش سنجش به منظور تشخیص سریع و آسان نمونه های آلوده به ویروس (VNN)بود. در روش ایمنوکروماتوگرافی پادتن نشاندار شده با ذرات کلوییدی طلا بر سایر نشانگرها ارجحیت دارد. ذرات طلا 30 نانومتری با غلظت های مناسبی از پادتن و در pH مشخصی پوشانیده شده و با آلبومین سرم گاوی پایدار گردیدند. سپس طراحی کیت ایمنوکروماتوگرافی برای تشخیص بتانوداویروس انجام شد. به این منظور حجم های مختلف کونژوگه طلا-پادتن بر روی پد کونزوگه ریخته و سپس مقادیر مختلف پلی کلونال آنتی بادی در خط تست قرار گرفت. همچنین به منظور تایید و اطمینان از عملکرد کونزوگه طلا-پادتن، خط کنترل حاوی پادتن ثانویه بر علیه پادتن موشی در منطقه مورد نظر قرار گرفت. در نهایت اجزای کیت تکمیل و نمونه مغز کفال ماهیان مشکوک مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد که این کیت قادر به شناسایی 103 بتانودایروس می باشد. در مرحله نهایی 50 نمونه سوپرناتانت مغز ماهی کفال طلایی که با استفاده از روش Real-time PCR و ایمونوهیستوشیمی، دارای تایید آلودگی با استفاده از کیت مزبور مورد ارزیابی قرار گرفتند. بطور کلی حساسیت و ویژگی این روش به ترتیب 64 و 100 درصد بود. صحت روش ایمونوکروماتوگرافی تقریبا با روش Real-time PCR و ایمونوهیستوشمی همخوانی دارد و در تست های غربالگری اپیدمیولوزیک می تواند بسیارمفید باشد.

Keywords:

کیت تشخیص سریع , نانوذره طلا , ایمونوهیستوشیمی , بیماری نکروز عصبی ویروسی