بررسی تخم تریکوسترنژیلوس های جدا شده از گوسفندان منطقه اصفهان به روش PCR-RFLP

سابقه و هدف: تریکوسترنژیلوس یکی از انگل های مشترک انسان و دام است که آلودگی به آن معضلی اقتصادی و بهداشتی قلمداد می گردد. لذا در این مطالعه، تخم کرم گونه های مختلف تریکوستنرنژیلوس جدا شده از مدفوع گوسفندان منطقه اصفهان به روش PCR-RFLP و با استفاده از قطعه rDNA-ITS2 مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: مطالعه به روش توصیفی بر روی محتویات دستگاه گوارش 70 راس گوسفند کشتار شده در کشتارگاه های شهر اصفهان و خوراسگان انجام پذیرفت. تخم های انگل با روش مستقیم و فلوتاسیون جدا و تخم کرم گونه های تریکوسترنژیلوس براساس شاخص های ریخت شناسی، شناسایی و جمعآوری شدند، سپس با روش PCR-RFLP مورد بررسی قرار گرفتند. در مطالعه ژنوتیپی DNA ژنومی تخم کرم ها، استخر اج شد و واکنش PCR با پرایمراختصاصی قطعه rDNA-ITS2 انجام گرفت. محصول PCR هر ایزوله توسط آنزیم های محدودکننده RsaI - HinfI - DraI هضم و بر روی ژل آگارزالکتروفورز شد و از آن ها عکس تهیه گردید. یافته ها: با توجه به تشابه مرفولوژی تخم گونه های مختلف تریکوسترنژیلوس در زیر میکرسکوپ تشخیص افتراقی آن ها امکان پذیر نمی باشد، لذا تشخیص با استفاده از الگوی ژنوتیپی تخم کرم ها به روش PCR-RFLP انجام پذیرفت. اندازه محصول PCR و DNA استخراج شده از تخم کرم ها یکسان و حدود 330 نوکلیوتید بود ولی الگوی PCR-RFLP گونه ها با یکدیگر متفاوت بود. پس از هضم محصول PCR آن ها با آنزیم RsaI دو قطعه حدود 138 و 190 نوکلیوتیدی مشاهده شد. محصول Trichostrungylus PCR به دست آمده، با آنزیم DraI هضم نشد، اما سه گونه T.vitrinus T.aziei و T.colubrifornois هضم شدند و دو قطعه حدود 110 و 215 نوکلیوتیدی در T.axei و T.colubriformis ر ویت گردید که الگویی مشابه همدیگر د اشتند. اما T.vitrinus واجد دو قطعه حدود 145 و 185 نوکلیوتیدی بود. از بین چهار گونه فوق تنها محصول PCR تریکوسترنژیلوس Colubriformis با آنزیم HinfI هضم شد و دو قطعه حدود 90 و 238 نوکلیوتیدی روی ژل اگارز مشاهده گردید. نتیجه گیری: با توجه به تنوع گو نه های انگلی و عدم تشخیص افتراقی آن ها به روش میکروسکوپی پیشنهاد می شود با استفاده از پرایمرها و آنزیم های محدودکننده مختلف، از روش PCR در تشخیص گونه های انگلی مورد نظر استفاده شود.

Keywords:

تاکسونومی , ایران , تریکوسترنژیلیوس , RsaI , HinfI , DraI , rDNA , ITS2 , PCR , RFLP