جداسازی ژن AtPCSI از گیاه آرابیدوپسیس تالیانا و همسانه سازی آن در ناقل pVLT33

فلزات سنگین در خاک به صورت زیستی قابل تجزیه نیستند و این واقعیت آنها را به یک یاز خطرناک ترین آلاینده های زیست محیطی تبدل کرده است. با توجه به معایب روش های فیزیکی و شیمیایی و گیاه پالایی در حذف فلزات سنگین خاک، استفاده از مهندسی ژنتیک می تواند روش مطمئن تری بدین منظور باشد. هدف از این مطالعه جداسازی ژن فیتوکلاتین سنتتاز از گیاه آرابیدوپسیس تالیانا و همسانه سازی آن در ناقل pVLT33 بود. ابتدا بذور گیا تهیه و در شرایط مناطب کشت گردیدند و پس از رشد کافی به منظور اعمال تنش به محیط هیدروپونیک یک دوم MS حاوی کلرید کادمیوم منتقل شدند. از نمونه های برگی RNA کل استخراج و در ادامه cDNA تک رشته ای سنتز شد. به منظور جداسازی ژن، آغازگرهای اختصاصی طراحی و پس از بهینه سازی شرایط PCR، ژن مورد نظر با استفاده از آنزیم pfu تکثیر شد. در مرحله بعد قطعه تکثیر شده، به وسیله تکنیک همسانه سازی T/A در ناقل pTZ57R/T درج شده، ناقل نوترکیب حاصل توسط کلونی PCR، برش های آنزیمی و همچنین توالی یابی تایید شد. در ادامه با استفاده از تکنیک برش و اتصال، ژن تکثیر شده در ناقل pVLT33، کلون و سازه به دست آمده به وسیله توالی یابی تایید شد. این سازه سنتز شده که مناسب انتقال به باکتری ریزوبیوم بود، اصطلاحا pVLT33-PCSI نام گذاری شد.

Keywords:

فلزات سنگین , آرابیدویسیس تالیانا , فیتوکلاتین , سنتتاز , همسانه سازی