معرفی ژنهای مرجع برای تجزیه و تحلیل یافته هایRT-qPCRدر اسپرم منجمد نریان

انجماد اسپرم موجب پیشرفتهای زیادی در صنعت پرورش حیوانات اهلی به خصوص از لحاظ انتشار ژنهای برتر شده است و بهبود نگهدارنده ها میتواند موجب افزایش قابل ملاحظهای در انتقال و تلقیح اسپرم های منجمد شود. در این مطالعه، ژنهایی ارزیابی شدند که حتم در اسپرم منجمد شده نریان بیان میشوند و با فراهم کردن تکثیری مناسب، به عنوان ژنهای مرجع در مطالعات آینده بیان ژن استفاده شوند. برای این منظور اسپرم های زنده و با تحرک بالای 70 درصد، از نمونه های تهیه شده از شش نریان مختلف انتخاب شدند. نمونه های اسپرم برای استخراج محتوی کل mRNA به دو بخش تقسیم شدند، یکی به عنوان نمونه تازه و دیگری پس از انجماد و ذوب مجدد. تکثیر سه ژن منتخب L32، β-actin و Ubiquitin ابتدا با روش RT-qPCR انجام و سپس پایداری ژنی با نرمافزارهای GeNorm و BestKeeper محاسبه شد. نتایج نشان داد که بیان ژن L32 در مقایسه با ژنهای β-actin و Ubiquitin پایداری کمتری دارد. نرمافزار GeNorm بهترین ترکیب ژنی را ژنهای β-actin و Ubiquitin معرفی و ارزش پایداری (M) برای بهترین ترکیب ژنی را 0/083 محاسبه کرد. با توجه به نتایج به دست آمده از نرمافزار BestKeeper ، با ثباتترین ژن خانه دار به منظور نرمال سازی داده های بیان ژن در آنالیز نتایج واکنش زنجیرهای پلیمراز در زمان واقعی، ژن β-actin مشخص شد.

Keywords:

اسپرم , نریان , انجماد , ژن کنترل داخلی