استفاده از روش‭Real Time PCR ‬جهت تعیین تعداد کپی ژن ‭cap ‬و ارتباط آن با میزان تولید کپسول در سویه های هموفیلوس آنفلونزا تیپ ‭b ‬جداشده

هموفیلوس آنفلونزا ‭Haemophilus influenzae ‬یک باکتری گرم منفی، منحصرا پاتوژن انسانی است که عامل عفونت های گوناگونی هم چون مننژیت، اپی گلوتیت، پنومونی، سلولیت، باکتریمی، آرتریت عفونی و عفونت ملتحمه چشم است. تیپ ب هموفیلوس انفلوانزا یکی از مهمترین عوامل ایجاد کننده مننژیت در کودکان زیر 5 سال در سراسر جهان می باشد. این تیپ باعث ایجاد تشنج و عقب ماندگیهای ذهنی در افراد غیر ایمن می گردد. در کشور ما نیز مرگ و میر و خسارات ناشی از این بیماری علیرغم درمان با آنتی بیوتیک ها بسیار زیاد و قابل توجه است. مهمترین عامل ویرولانس و ایمنی زایی این باکتری کپسول پلی ساکاریدی آن است که از پلی مر ‭(PRP) Polyribosyl ribitol phosphate ‬ساخته شده است‭.PRP ‬نقش اصلی در ویرولانس را ایفا می کند و واکسن تهیه شده بر علیه این باکتری حاوی‭PRP ‬خالص از تیپ ب است ، انتخاب و جداسازی باکتری که میزان ‭PRP ‬بالایی داشته باشد مهمترین گزینه جهت تولید این واکسن میباشد. ژنهای مسیول تولید‭PRP ‬بر لوکوس ‭cap b ‬قرار دارند و اغلب نمونه های هموفیلوس آنفلونزا ‭b ‬دارای چند کپی از این لوکوس هستند. از لحاظ تعداد ‭cap b ‬سویه های این باکتری با هم تفاوت دارند و اغلب تعداد 2 الی 6 کپی گزارش شده است. از آنجاییکه دستیابی به سویه واکسینال مناسب که بالاترین تولید کپسول پلی ساکاریدی ‭PRP ‬را در بر داشته باشد از اولویت های انجام این پروژه می باشد. از لحاظی که هر چه تعداد این لوکوس ها بیشتر باشد قابلیت تولید ‭PRP ‬بیشتر گزارش شده در این مطالعه با استفاده از روش ‭Real Time PCR ‬و سه جفت پرایمر شامل پرایمر اختصاصی تیپ ب، ‭(capb) IS‬‮‭1016‬ و‭rpoB (‬ژن تک کپی بعنوان استاندارد) تعداد کپی ‭cap ‬و ‭IS ‬در سویه های هموفیلوس آنفلونزا تیپ ب بررسی شد. طبق نتایج دو سویه کلینیکی دارای 3 کپی ‭capb ‬و 4 کپی از ‭IS‬‮‭1016‬ بودند. هر چند که در بقیه 3 نمونه 2 کپی از کپسول وجود داشت ولی تعداد ‭IS‬‮‭1016‬در آنها متفاوت بوده و یک نمونه فقط دو کپی از این ژن را دارا بود. طبق نتایج روش بیال نمونه های که دارای بیشترین تعداد لوکوس ‭cap b ‬بوده بلطبع توانایی تولید مقدار بیشتر‭PRP‬را دارا بودند. واژه های کلیدی: هموفیلوس آنفلوانزا تیپ ب، ویرولانس، کپسول، ‭PRP‬، لوکوس ‭cap b‬،‭IS‬،‮‭1016‬ ‭Real Time PCR