بررسی حساسیت و اختصاصیت فتوپروتئین آکوئورین در شناسایی و اندازه گیری یون کلسیم

با توجه به اینکه یون کلسیم در بسیاری از فرآیندهای زیستی مانند پیام رسانی و متابولیسم سلولی و فرآیندهای صنعتی ازجمله مهندسی آب نقش مهمی ایفا میکند اندازه گیری آن حائز اهمیت بوده و بدین منظور روشهای مختلفی مانند روشهای رنگ سنجی و استفاده از پروبهای حساس به کلسیم استفاده می شود. بیولومینسانس به عنوان یک فناوری کارآمد جهت سنجش هایی با حساسیت و اختصاصیت بالا موردتوجه است. از بین سیستم های بیولومینسانسی، فتوپروتئین ها به دلیل ویژگی های منحصربه فرد خود به آنالیزورهای بسیار عالی در مطالعات داخل و خارج سلولی تبدیل شده اند. در این مطالعه پس از بیان و تخصیص فتوپروتئین آکوئورین در E. coli سویه BL21 (DE3)، بهینه سازی غلظت و زمان انکوباسیون فتوپروتئین-سوبسترا (کلنترازین) با نسبت 0/4 میلیگرم بر میلی لیتر به 100 میکرومولار همچنین با نسبت حجمی 2 به 1 و زمان انکوباسیون 12 ساعت در دمای 4 درجه سانتیگراد انجام شد. با توجه به اینکه آلودگی یون کلسیم محیط باعث خطا در اندازه گیری نمونه موردنظر می شود، برای حذف آلودگی کلسیم از EDTA با غلظت بهینه شده (0,01) میلی مولار در بافر مربوط به انکوباسیون استفاده شد. سپس رفتار دوز- پاسخ آکوئورین نسبت به کلسیم در شرایط فوق به دست آمد و با روشهای آماری پارامترهایی مثل EC50= 5.78 0 و /2 1 0 محاسبه گردید. همچنین برای بررسی اختصاصیت فتوپروتئین آکوئورین در سنجش یون کلسیم، اثر نمکهای کلرید فلزات مختلف شامل باریم، منگنز، منیزیوم،کادمیوم،کبالت، آلومینیوم، سدیم و غیره با غلظت 1 میلیمولار، روی فعالیت بیولومینسانسی آن تست شد. نتایج نشان داد که استفاده از فتوپروتئین آکوئورین جهت اندازهگیری یون کلسیم از اختصاصیت بسیار بالایی برخوردار است.

Keywords:

فتوپروتئین های وابسته به کلسیم , آکوئورین , بیولومینسانس , اختصاصیت