شناسایی چند شکلی های ژن HSP۷۰A۱A در گوسفندان نژاد مهربان و رومانف با تکنیک PCR-SSCP

     در اقلیم­ های مختلف، نقش مقاومت سلولی به استرس­های ناشی از تغییر دما از طریق خانواده­ای از پروتئین­ها که اصطلاحا، پروتئین­های شوک گرمایی (HSP) نامیده می­شوند، ­کنترل می شود. در پژوهش حاضر، شناسایی چند شکلی­های تک نوکلئوتیدی موجود در مناطقی از ژن HSP۷۰A۱A در گوسفند بومی نژاد مهربان و گوسفند وارداتی نژاد رومانف به جهت ویژگی این نژادها به سازگاری در اقلیم ­های سردسیری، بررسی شدند. در مجموع، تعداد ۱۴۱ حیوان شامل گوسفند نژاد مهربان (۱۰۰ راس) و گوسفند نژاد رومانف (۴۱ راس)، به طور تصادفی انتخاب و مراحل خونگیری و استخراج DNA طبق دستورالعمل­های متداول انجام شد. سپس، واکنش­ زنجیره­ای پلیمراز (PCR) جهت تکثیر اگزون ژن HSP۷۰A۱A (Oar_v۴.۰; Chr۲۰, NC_۰۱۹۴۷۷.۲) به اندازه ۲۴۷ و ۲۹۸ جفت باز انجام شد. همچنین، جهت تعیین چند شکلی نمونه ­ها از تکنیک PCR-SSCP و متعاقب آن، توالی یابی مبتنی بر سانگر استفاده شد. بر اساس نتایج SSCP، به طور مشابه در هر دو نژاد مهربان و رومانف تعداد ۵ الگوی باندی مشاهده شد که قطعات تکثیر شده ۲۴۷ و ۲۹۸ جفت بازی به ترتیب دو و سه الگوی الکتروفوزی را دارا بودند. علاوه بر این، هیچ تفاوتی در فراوانی الگوهای مشاهده شده بین این دو نژاد گوسفند یافت نشد. همچنین، در این نژادها نتایج توالی یابی وجود تعداد ۵ چند شکلی تک نوکلئوتیدی (SNP) شامل g.۲۶۵۶۲۲۵۲C>A، g.۲۶۵۶۲۲۶۱G>C، g.۲۶۵۶۲۲۷۰T>C، g.۲۶۵۶۲۲۷۳C>T و g.۲۶۵۶۲۲۷۹C>T در قطعه ۲۴۷ جفت بازی و تعداد سه چند شکلی تک نوکلئوتیدی شامل g.۲۶۵۶۱۷۴۵T>C، g.۲۶۵۶۱۷۸۴C>T و g.۲۶۵۶۱۸۷۷G>A در قطعه ۲۹۸ جفت بازی شناسایی نمود. در مجموع، نتایج نشان داد که، همه چند شکلی­ها به غیر ازg.۲۶۵۶۱۷۴۵T>C  و g.۲۶۵۶۱۸۷۷G>A به طور معنی­داری خارج از تعادل هاردی واینبرگ هستند (۰۵/۰p<). به عنوان نتیجه­گیری نهایی، با توجه به نقش پروتئین­های شوک دمایی در مقاومت به استرس­های محیطی، شناسایی این چند شکلی­ها می تواند تاثیر بسزایی در درک مکانیسم سازگاری  به تحمل دمایی در نژادهای گوسفندان بومی ایرانی داشته باشد. 

Keywords:

Cold tolerance , HSP۷۰A۱A gene , Mehraban sheep , Polymorphism , Romanov sheep , تحمل سرمایی , چندشکلی نوکلئوتیدی , ژن HSP۷۰A۱A , گوسفند رومانف , گوسفند مهربان