تولید فاژهای پلیکلونال حاوی قطعات ژنی آنتیبادی اختصاصی باکتری Xanthomonas citri subsp. citri با استفاده از فنآوری نمایش فاژی

شانکر باکتریایی مرکبات از بیماریهای باغات لیمو در جنوب کشور با عامل Xanthomonas citri subsp. citriمیباشد. تکنیک فاژنمایی از راهکارهای تولید آنتیبادیهای اختصاصی به منظور شناسایی گیاهان آلوده و همچنین تولید گیاهان مقاوم به بیماری است. در این تحقیق قابلیت استفاده از این سیستم برای تولید فاژهای نوترکیب حاوی قطعات آنتیبادی اختصاصی برعلیه باکتری عامل بیماری شانکر مرکبات بررسی شد. برای این منظور، پروتئین تاثیرکننده (pthA) و پیلوس (HrpE) که از اجزای اساسی سیستم ترشحی نوع سه باکتری هستند و نقش ضروری در بیماریزایی پاتوژن دارند، به عنوان آنتیژن انتخاب شدند. ابتدا پروتئینهای pthA و HrpE به صورت نوترکیب در میزبان باکتریایی تولید شدند و با روش کروموتوگرافی خالص گردیدند. از کتابخانه های فاژی حاوی قطعات ژنی نواحی متغیر آنتیبادی برای جداسازی فاژهای اختصاصی استفاده شد. غنیسازی جمعیت فاژهای اختصاصی با انجام سه مرحله غربالگری بر علیه پروتئین های خالص شده pthA و HrpEانجام شد و اختصاصیت فاژهای حاصله بر علیه آنتیژن توسط آزمون الیزا بررسی شد. فاژهای نوترکیب قابلیت اتصال به پروتئین های pthA و HrpE را داشته و قادر به ردیابی گیاهان آلوده به بیماری شانکر باکتریایی مرکبات نیز بودند. از فاژهای جداسازی شده میتوان به منظور تولید آنتیبادی اختصاصی مونوکلونال استفاده نمود.

Keywords:

افکتور پروتئین pthA , پروتئین HrpE , شانکر باکتریایی مرکبات , غربالگری , نمایش فاژی