بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم فیبرینولایتیک تخلیص شده از باکتری باسیلوس۹۹KDm

آنزیم درمانی به یک روند رایج در پزشکی در ۱۰۰ سال گذشته تبدیل شده است ، آنزیم های فیبرینولیتیک نوع خاصی از پروتئاز ها هستند که می تواند شبکه فیبرین لخته های خون را تخریب کنند ۱. بیشترین پروتئازهای تجاری ، عمدتا خنثی و قلیایی ، توسط ارگانیسم های متعلق به جنس باسیلوس تولید می شوند .پروتئازهای خنثی باکتریایی در محدودهpH برابر با ۵ تا ۸ فعال هستند و تحمل حرارتی نسبتا کمی دارند ۲. خواص فیزیولوژیکی باسیلوس هاکاملا متنوع است ، مانند توانایی تجزیه سوبستراهای مختلف به دست آمده از منابع گیاهی و حیوانی مانند سلولز، نشاسته ، پروتئین . باسیلوس آگار و هیدروکربن ها و همچنین سوخت های زیستی هستند ۳. هدف در این پژوهش بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم فیبرینولایتیک باکتریایی می باشد. استوک باکتری باسیلوس استخراج شده از فاضلاب های کشتارگاه های استان کرمان در محیط (نوترینت براث) و محیط جامد(نوترینت آگارکازئین )محیط اختصاصی پپتون(۰/۵گرم)، کازئین (۰/۱گرم)، منیزیوم سولفات (۰/۰۲گرم)، سدیم کلرید (۰/۰۲گرم)، پتاسیم دی هیدروژن فسفات (۰/۰۵ گرم) رشد یافت ، که در محیط جامد واجد فعالیت پروتئازی شناخته شد. در غلظت ۵۰ میکرولیتر از آنزیم با غلظت (۶۶/۰۲ میکرومول/دقیقه )، ۵۰ میکرولیتر از سوبسترا کازئین با غلظت (۰/۱%) و ۲۰۰ میکرولیتر از بافر فسفات -۴۰ میلی مولار با pH برابر با ۸ و ۳۰۰ میکرولیتر (تری کلرواستیک اسید)، (۵%) دارای بیشترین فعالیت پروتئازی بود. پس از تلقیح و به مدت ۴۸ ساعت انکوبه کردن در شیکر انکوباتور نتایج نشان داد، زمانی که محیط کشت توسط منبع کربنی (گلوکز ۱/۲۵ گرم)، عصاره مخمر (۰/۷۵ گرم)، پتاسیم دی هیدروژن فسفات (۰/۷۵ گرم)، کودمرغ (۰/۷۵ گرم)، pH برابر با ۶و دما ۲۵بهینه سازی شد. بیشترین میزان تولید آنزیم (۵۶%/۱۴۱) را نشان می دهد. بیشترین بازده رشد باکتریایی و تولید آنزیم در سه تایم متفاوت (۲۴ ، ۴۸، ۷۲) مورد بررسی قرار گرفت و اندازه گیر ی های صورت گرفته نشان داد که میزان تولید آنزیم در محیط اختصاصی بعد از ۴۸و دمای ۲۵و pH برابر با ۶ بیشترین میزان از آنزیم را به خود اختصاص می دهد. میزان تولید آنزیم در شرایط عادی (۸۹/۳۴ %) ولی درشرایط بهینه بعداز ۴۸ ساعت (۶۶۴/۳%) بهینه سازی شده است

Keywords:

آنزیم فیبرینولیتیک , پروتئاز , لخته خون , باسیلوس , بهینه سازی