جداسازی، شناسایی و کشت سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی مرغ تخم‎گذار

چکیده مبسوط مقدمه و هدف: امروزه شدت و سرعت تولید در مرغان تخم گذار باعث بروز ناهنجاری‎های متعدد از جمله مشکلات استخوانی و اسکلتی شده است که زیان اقتصادی سنگینی را به‎دنبال دارد. انجام مطالعات روی سلول های بنیادی استحصال شده از مرغان تخم‎گذار می تواند باعث بهبود شناخت و درک ما از مکانیسم های تمایزی و مولکولی در سطح سلولی در این پرندگان شود. به‎همین منظور هدف از این مطالعه، استحصال سلول‎های بنیادی مزانشیمی از بافت چربی مرغان تخم گذار و کشت این سلول ها در شرایط آزمایشگاهی بود. مواد و روش ها: در این تحقیق، سلول‎های بنیادی مزانشیمی طی شرایط استریل در محیط آزمایشگاه از بافت چربی احشایی مرغان تخم‎گذار (سویه های‎لاین w-۳۶) جداسازی شد. سپس در شرایط محیط کشت استاندارد، سلول های موردنظر به‎وسیله تیمار با آنزیم کلاژناز از سایر سلول ها جدا شده بود. سلول‎های استحصال شده پس از چند بار سانتریفیوژ کردن و خالص‎سازی، در محیط کشت DMEM-F۱۲ حاوی سرم جنین گاوی ۱۰% کشت داده شد. در طول ۲۱ روز، برای بررسی عملکرد سلول های جدا شده و توانایی رشد و تکثیر سلولی، روند رشد سلول‎ها و چگونگی تشکیل کلنی سلولی مورد ارزیابی قرار گرفت. سلول ها تا ۱۴ بار با مورفولوژی طبیعی پاساژ داده شدند. برای بررسی سرعت رشد سلول ها این آزمون در پاساژهای ۲، ۴ و ۸ تکرار شد تا کاهش توانایی رشد سلول ها با افزایش سن، مورد بررسی قرار گیرد. یافته‎ها:  حدود ۳ الی ۴ روز بعد از کشت، سلول های چسبیده ۷۰-۸۰ درصد فلاسک را پر کردند. میانگین روند رشد سلول‎ها در پاساژهای ۲، ۴ و ۸ به ترتیب برابر ۳۷/۰۳، ۶۰/۹۲ و ۱۰۱/۴۲ درصد که نشان دهنده ارتباط، توانایی تکثیر و خود نوسازی سلول های بنیادی با سن آن­ها بود. بعد از گذشت ۹ روز از کشت سلولی، تعداد کلنی‎های تشکیل شده از سلول های حاصل از پاساژهای ۲ و ۵ با غلظت های ۱۷۵، ۳۵۰ و ۵۲۰ سلول در هر سانتی‎متر مربع پلیت ۶ خانه‎ای به‎ترتیب برابر با ۲۲، ۶۲ و ۸۴ کلنی بود. نتیجه‎گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که سلول های بنیادی مزانشیمی استحصال شده از بافت چربی مرغان تخم‎گذار، توانایی حفظ خصوصیات بنیادی خود در طی تقسیمات سلولی متعدد را دارند و می‎توانند ساختار مورفولوژیکی و خصوصیات خاص خود از جمله عملکرد مربوط به رشد را حفظ نمایند.

Keywords:

Bone differentiation , Genistein , Mesenchymal stem cell , Laying hen , بافت چربی , سلول بنیادی مزانشیمی , کشت سلولی , مرغ تخم‎گذار