بررسی روشهای استخراج RNA ویروس لکه حلقوی نکروتیک درختان میوه هسته دار درمناطق کشت استان گلستان

استخراج اسید نوکلئیک مهمترین مرحله در آزمونهای مولکولی است. عصاره استخراج شده از بافتهای درختان میوه هسته دار شامل مهار کننده های مختلفی است که در امرجداسازی اسید نوکلئیک خالص ممانعت ایجاد می کند. برای دستیابی به بهترین بافر جهت استخراج RNA تام ویروس PNRSV، پنج روش استخراج مورد بررسی قرار گرفت. ژنومهای بدست آمده از هر روش در ژل آگاروز TAE دو درصد الکتروفورز و در طول موجهای 230، 260، 270 و 280 اسپکتروفتومتری شدند. RNA تام استخراج شده به روش گوانیدین تیو سیانات ارائه شده توسط مکنزی و همکاران (Mackenzie et al,2001) با به کار گیری دو یا سه مرحله اضافی استخراج با فنول، دارای ناخالصی کمی بود ولی دراسپکتروفتومتری فاقد نسبت جذب نوری مناسب بود. RNA استخراج شده با بافر ترایزول دارای رسوب نسبتا کمی نسبت به بافر گوانیدین ایزو تیو سیانات بود و دارای جذب نوری مناسب با نسبت 1/2-1 بود. RNA استخراج شده با بافرکلرید لیتیم دارای ناخالصی فراوان و نسبت جذب نوری نا مناسب در اسپکتروفتومتری بود. نتایج بدست آمده از الکتروفورز ژنومهای حاصله از هر روش استخراج، نشان داد که بافرهای تهیه شده به روش سانچز ناوارو و همکاران وروش ترایزول، علیرغم وجود ناخالصی نسبت به سایر بافرها، برای استخراج ژنوم ویروس لکه حلقوی نکروتیک درختانمیوه هسته دار مناسب می باشند.

Keywords:

ویروس لکه حلقوی درختان میوه هسته دار , بافر استخراج , RNA