شناسایی، جداسازی و همسانه سازی ژن کد کننده آنزیم کیتیناز از گیاه کدو تنبل

پروتئینهای وابسته به بیماریزایی آن دسته از ترکیبات پروتئینی هستند که توسط گیاه میزبان در پاسخ به حمله عوامل بیماریزا یا تنشهای محیطی در گیاه تولید شده و تجمع مییابند. آنزیمهای کیتینازی از مهمترین خانوادههای پروتتئینی دخیل در مقاومت به بیماریهای قارچیدر گیاهان میباشند. این آنزیم با شکستن پیوندهای گلیکوزیدی موجود در پلیمر خطی کیتین، ساختمان این ترکیب را در هم میشکند. خانواده کدوییان، خانواده بزرگی بوده که شامل تعداد زیادی گونههای وحشی و زراعی میباشد، گونههایی با مقاومت بالا به بیماریهای قارچی که میتوانند به عنوان منابع ژنتیکی مقاومت برای انتقال ژن و اصلاح ارقام حساس زارعی مورد استفاده قرار گیرند. در این تحقیق آنزیم کیتیناز از گیاه کدو تنبلCucurbita maxima شناسایی، جداسازی و همانندسازی گردید. بدین منظور با توجه به اطلاعات دردسترس در پایگاهNCBIطراحی پرایمرهای مناسب انجام شد و پس از تکثیر قطعه مورد نظر از طریقPCRدر وکتورpTZ57R/Tدرون باکتریE.coliهمسانه سازی گردید. نتایج تعیین توالی نشان داد که قطعه توالی یابی شده دارای منطقه کد کنندهای به طول 879 جفت باز و فاقد نواحی اینترونی است. پس از انجام جستجوی همولوژی در پایگاه دادهNCBIبا استفاده از الگوریتمBLASTشباهت زیادی میان ساختار این ژن و ژنهای کیتینازی کلاس 3 جدا شده از خانواده کدوییان مشاهده شد.

Keywords:

آنزیم کیتیناز , جداسازی ژن , همسانه سازی , کدو تنبل