شناسایی پروتئین آنتی زنی دیکروسلیوم دندریتیکم در گوسفندان آلوده

دیکروسلیازیس یکی از بیماری های انگلی مهم در دام هاست که توسط ترماتودی بنام دیکروسلیوم دندریتیکم ایجاد می شود. تحقیق حاضر با هدف شناسایی آنتی زن تشخیصی در آلودگی طبیعی گوسفند به دیکروسلیوم دندریتیکم انجام گرفت. برای تهیه دو نوع آنتی زن بدنی و متابولیک، از کرم های بالغ که از مجاری صفراوی کبدهای آلوده جمع آوری شده بود استفاده شد. عصاره خام ترماتود بالغ متعاقب هموزنیزاسیون و سانتریفوژ بعنوان آنتی ژن بدنی تهیه شد. آنتی زن دفعی ترشحی هم با آنکوباسیون کرم بالغ در شرایط آزمایشگاهی تهیه گردید. نمونهها ابتدا با روش سدیم دودسیل سولفات پلی اکریلامیدژل الکتروفورزیس (SDS-PAGE) تحت الکتروفورز شناسایی چروتئین ها قرار گرفت و سپس آنتی زن (های) اختصاصی توسط روش وسترن بلاتینگ تعیین هویت شد. بدین منظور آنتی زن های تهیه شده به کاغذ نیتروسلولز انتقال یافت و سپس با استقرار غشا در بافر مسدودکننده، آنتی بادی اولیه و آنتی بادی کونژوگه در فواصل زمانی مشخص، پروتئین اختصاصی تحت شناسایی قرار رفت. برای بررسی وجود واکنش مقاطع، آنتی زن های فاسیولا از هر دو نوع بدنی و دفعی ترشحی، همچنین آنتی زن کیست هیداتیک و سیستی سرکوس تنیوکولیس همآزمایش شد. در ایمونوبلاتینگ آنتی زن های بدنی و دفعی ترشحی کرم بالغ دیکروسلیوم دندریتیکم یک باند با وزن مولکولی 130 کیلو دالتون بطور مشترک در هر دو آنتی ژن و در آنتی زن دفعی ترشحی علاوه بر وجود این باند، شش باند پروتئینی با وزن مولکولی بین 25 تا 60 کیلودالتون توسط سرم مثبت گوسفندان با آلودگی طبیعی مشخص گردید. بنابریافته های بررسی حاضر، باند پروتئینی با وزن مولکولی 130 کیلو دالتون بعنوان آنتی زن اختصاصی برای تشخیص دیکروسولیازیس در گوسفند معرفی می شود.

Keywords:

دیکروسلیوم دندریتیکم , آنتی زن اختصاصی , گوسفند